何 念,曲 颜,张念杰,万 磊,杨雪峰

    (遵义医科大学第二附属医院 胃肠外科,贵州 遵义 563006)

    结直肠癌(colorectal cancer, CRC)是常见的消化道肿瘤之一。2019年全球范围内结直肠癌新增发病率和死亡率均分别位于男女性癌症病例的第3位[1]。由于CRC发病隐匿强的原因,CRC确诊时已处于中晚期,对于中晚期结直肠癌患者而言,治疗手段主要采用外科手术切除,辅以放化疗的治疗手段。但随着化疗药物如5-氟尿嘧啶和奥沙利铂的广泛使用,CRC逐渐对临床化疗药物产生获得性耐药性,获得性耐药是CRC复发及影响预后的重要因素,严重影响患者的生存率[2-3]。MicroRNAs (miRNAs)已经成为多种肿瘤的检测、诊断、治疗选择、预后及调节机制中的潜在标志物[4]。miR-210在结直肠癌发生、发展中起到一个至关重要的作用。研究发现miR-210能够抑制结直肠癌细胞周期进程,上调细胞ROS集聚,诱导细胞凋亡[5]。血清中miR-210的表达可能是结直肠癌诊断和预后的潜在非侵入性标志物[6]。研究证实miR-210-3p下调后,通过促进DNA损伤修复及代谢重编程,进而降低结直肠癌细胞对5-FU的药物敏感性[7]。

    目前,miR-210对结直肠癌细胞顺铂耐药的影响及机制还不是特别清楚,因此,本项目研究miR-210在人结直肠癌细胞株及顺铂耐药细胞株中的表达,探索miR-210对人结直肠癌细胞增殖、凋亡调控的影响及潜在机制,为后续深入研究结直肠癌细胞对顺铂类药物敏感性的研究做坚实的理论基础。

    1 材料与方法

    1.1 材料 人结直肠癌细胞顺铂耐药株HCT-116/DDP由本实验室构建及保存(耐药指数IR：126.211);HCoEpiC人正常结肠上皮细胞购自于赛百慷(上海)生物技术股份有限公司;人结直肠癌细胞(HCT-116、HT-29、SW620)购自于中国科学院细胞库;miR-210 mimics及inhibitor购自于广州锐博生物;顺铂购自德国Merck公司;Cell-Counting-Kit-8(CCK-8细胞活力检测试剂盒)、Annexin V-FITC/PI检测试剂盒、RIPA细胞快速裂解液购自北京索莱宝生物技术有限公司;McCoy's 5a培养基、LipofectamineTM3000脂质体转染试剂、优质胎牛血清(Fetal bovine serum,FBS)、TRIzol购自美国Thermofisher;PVDF膜、化学发光试剂购自美国 Millipore 公司;SYBR Green PCR试剂盒购自于美国KAPA Biosystems公司;PrimeScriptTMRT Master Mix购自于日本TAKARA;兔抗Bad、Bcl-2、Cleaved-caspase-3、GAPDH购自于英国abcam;兔抗ABCG2、MRP2、P-gp、Wnt3a、β-Catenin购自于中国Bio-Swamp;HRP偶联抗兔二抗购自武汉Proteintech;其他试剂均为国产分析纯 ......