吴逸如,白 雨,张启东,刘文虎

    (首都医科大学附属北京友谊医院 肾内科, 北京 100050)

    随着人口老龄化及糖尿病、高血压发病率的增加,慢性肾脏病(CKD)的患病率不断上升[1]。当CKD进展至终末期肾脏病(ESRD)阶段,患者的生存必须依赖肾脏替代治疗[2],给患者的家庭和社会带来巨大的负担。如何延缓CKD进展至ESRD是目前肾病领域关注的热点问题。肾脏纤维化是所有CKD进展至ESRD的共同病理生理机制[3],延缓肾脏纤维化对于延缓CKD的进展至关重要,然而,目前临床上无有效的抗肾脏纤维化药物[4]。最近的研究表明,许多分子在肾脏纤维化的发生发展中发挥着重要作用,其中糖原合成酶激酶(GSK-3β)是一个不可忽视的治疗靶点。

    GSK-3β是一种丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶,在各种器官组织的纤维化中发挥重要作用,包括心脏、肺、肝脏和肾脏等[5]。然而目前关于GSK-3β与纤维化的研究结果并不完全一致[5]。本课题组前期研究证实了Renalase可以通过抑制ERK通路和氧化应激等机制来减轻肾脏纤维化[6-7]。目前尚不清楚GSK-3β是否参与了这一过程。本研究拟探讨GSK-3β在Renalase抗纤维化过程中的作用及其可能的机制。

    1 材料与方法

    1.1 建立动物模型

    1.1.1 小鼠的选择和喂养 5周龄雄性C57BL/6小鼠,体重16～18 g,购于中国医学科学院实验动物研究所。饲养环境为温度(22 ± 1)°C, 相对湿度(55 ± 5)%的SPF级动物实验室,自由进食水。所有动物喂养2周后进行手术处理。所有实验动物和实验动物安乐死的执行,均取得首都医科大学附属北京友谊医院实验动物管理委员会的许可,并且完全符合《实验动物管理和使用指南》的要求,所有实验动物的饲养均符合SPF及实验动物饲养要求。

    1.1.2 单侧输尿管结扎模型的建立 小鼠腹腔注射戊巴比妥钠(50 mg/kg)麻醉。单侧输尿管结扎(UUO)组于左侧肾脏近肾门处结扎输尿管,再于输尿管远离肾门处做二次结扎。假手术(Sham)组只游离左侧输尿管而不结扎,然后关闭腹腔。

    1.1.3 模型小鼠的给药 购买的小鼠饲养2周后,随机分为下列8组,每组5只并给予相应处理,2周后将小鼠处死用于后续实验。具体分组及处理如下：(1)Sham+Ad-β-gal组：小鼠给予假手术处理,并于手术时于左侧肾静脉注射1.0×1010PFU对照腺病毒;(2)Sham+ Ad-Renalase组：小鼠给予假手术处理,并于手术时于左侧肾静脉注射1.0×1010PFU Renalase腺病毒;(3)UUO+ Ad-b-gal组：小鼠给予单侧输尿管结扎处理,并于手术时于左侧肾静脉注射1.0×1010PFU对照腺病毒;(4)UUO+Ad-Renalase组：小鼠给予单侧输尿管结扎处理,并于手术时于左侧肾静脉注射1.0×1010PFU Renalase腺病毒;(5)UUO+Ad-Renalase+AAV-GSK-3β组：本组小鼠手术前10 d通过尾静脉注射1.0×1012PFU过表达GSK-3β腺相关病毒;小鼠给予单侧输尿管结扎处理,并于手术时于左侧肾静脉注射1.0×1010PFU Renalase腺病毒;(6)UUO+Ad-Renalase+Ad-GSK-3β-RNAi组：小鼠给予单侧输尿管结扎处理,并于手术时于左侧肾静脉注射1.0×1010PFU Renalase腺病毒及1.0×1010PFU Ad-GSK-3β-RNAi腺病毒;(7)UUO+Ad-Renalase+TM组：小鼠给予单侧输尿管结扎处理,并于手术时分别于左侧肾静脉注射1.0×1010PFU Renalase腺病毒,于腹腔注射1mg/kg的TM;(8)UUO+Ad-Renalase+4-PBA组：小鼠给予单侧输尿管结扎处理,并于手术时分别于左侧肾静脉注射1.0×1010PFU Renalase腺病毒,于腹腔注射300 mg/kg的4-PBA ......