顾俊婷，焦 凯，马雨轩，王凯燕，陈吉华，牛丽娜

    (军事口腔医学国家重点实验室，口腔疾病国家临床医学研究中心，陕西省口腔医学重点实验室，空军军医大学口腔医院修复科，陕西 西安710032)

    胶原蛋白是细胞外基质的常见组分之一，能够为细胞活动提供具有高度生物相容性的外环境。这种良好的生物相容性使得胶原蛋白成为理想的植入性医疗材料，已被应用于诸多领域[1]。然而，在骨缺损修复中，胶原支架的骨诱导性能有限，机械性能与耐酶解性较弱，不利于骨愈合过程中的空间维持[2]。交联可用于修饰胶原结构，以提高胶原的机械性能及其耐酶解能力[3]。同时化学交联体系还可将诸多功能性基团接枝到胶原分子上，赋予胶原相应的生物性能[3-4]。因此，化学交联是对胶原支架进行特定改性的有效方法。

    聚磷酸盐是一种生物相容性良好，且广泛分布于真核与原核生物中的线性多聚体，在多项重要生命活动中起到至关重要的作用[5]。大量研究表明聚磷酸盐在骨组织的形成过程中，对成骨相关细胞起到调控作用[6]。聚磷酸盐可促进间充质干细胞向成骨细胞分化，并加速成骨细胞矿化过程，同时抑制破骨细胞前体向破骨细胞分化[7]。通过上述细胞调控机制，聚磷酸盐可起到促进骨缺损修复的作用。基于此，本研究拟将聚磷酸盐交联到胶原上，并对改性后的胶原进行生物安全性检测和体内外成骨性能表征。

    1 材料与方法

    1.1 材料

    商品化胶原海绵(Ace Surgical Supply，美国)；聚磷酸铵(高聚)，甲基绿染料(上海麦克林)；碳二亚胺盐酸盐[1-(3-dimethylaminopropyl)-3-ethylcarbodiimide hydrochlorid，EDC]，N-羟基琥珀酰亚胺(N-hydroxysuccinimide，NHS)，六甲基二硅烷(Sigma，美国)；无水乙醇(北京国药)；茜素红、地塞米松、40 mL/L多聚甲醛、活/死染色试剂盒(北京索莱宝)；ɑ-MEM 培养基、胎牛血清(Hyclone，美国)；CCK-8试剂盒(上海七海生物)；碱性磷酸酶(alkaline phosphatase, ALP)染色试剂盒(Gomori钙钴法；陕西中晖赫彩)；ALP定量试剂盒(微板法；南京建成生物)；Prime ScriptTMRT Mater Mix、TB GreenTMPremixExTaqTM(Takara，日本)；BMP-2一抗、骨桥蛋白(osteopontin,OPN)一抗、Goldner染色试剂盒(武汉塞维尔)。全波长酶标仪(BioTek ......