郝一鸣，权 鑫，李胜友，马 腾，夏 冰，梅良伟，郑 毅，高 雪，黄景辉，罗卓荆

    (1空军军医大学西京医院骨科，陕西 西安 710032； 2西北大学生命科学院，陕西 西安 710068)

    创伤是45岁以下成年人的第一死因。创伤患者最多见、最严重的疾痛是神经损伤造成的肢体残疾。我国目前周围神经损伤患者有近2 000万人，是周围神经损伤发生数量最多的国家之一。周围神经虽然具有一定的再生能力，但其再生能力有限，大部分再生神经纤维还没有到达其支配的靶组织，远端靶组织就已萎缩，最终导致功能无法恢复[1-2]。因此，周围神经损伤后，“如何加快神经轴突生长”是神经科学研究的难点和热点问题。电刺激在临床上已被广泛用于周围神经损伤的治疗。周围神经损伤后，在近端神经干给予短时程电刺激(3 V，20 Hz，20 min)，可缩短神经元的休克期，使神经再生速度加快20%，显著提高运动功能恢复[3-4]。临床研究同样证实了神经干电刺激加快周围神经生长的有效性[5-6]。目前，研究证实了电刺激加快神经轴突生长的潜能，但关于其分子机制的研究却一直停滞不前[7]。

    非编码RNA是一类不能编码蛋白质的RNA，在基因调控、人类疾病防治及生物进化探索等方面都具有重要意义。微小RNA(microRNA,miRNA)是一类内源性具有调控功能的小分子非编码RNA，是转录后调控基因表达的重要方式，在发育及再生等过程中发挥重要作用[8-9]。前期，我们的体外研究发现了miR-363-5p通过靶向DCLK1参与了电刺激促进神经轴突的生长[7]。那么，miR-363-5p在体内神经损伤模型中对神经再生与功能恢复的作用究竟如何，值得探究。本研究通过制备miR-363-5p 抑制与过表达的慢病毒表达载体，并将其显微注射入背根神经节(dorsal root ganglion，DRG)内，在体内调节miR-363-5p表达，并通过制备坐骨神经损伤模型，评价miR-363-5p对神经再生的调节作用。

    1 材料与方法

    1.1 材料

    实验仪器：电子天平(日本Shimadzu公司)；肌电图记录仪(丹麦Dantec公司)；透射电子显微镜(日本JEM-2000EX)；肌电图记录仪(Dantec, Denmark)；显微手术器械(上海手术器械厂)；解剖显微镜(安徽芜湖光学仪器厂)；荧光显微镜(日本尼康公司)；冰冻切片机(日本莱卡公司)。

    实验动物与试剂：Sprague-Dawley(SD)大鼠(空军军医大学动物实验中心)；荧光金(美国Biotium公司)；冰醋酸溶液、多聚甲醛、蔗糖、四氧化锇(上海碧云天公司)；Masson染色试剂盒、二甲苯、无水乙醇、戊二醛、甲苯胺蓝(西安天隆科技公司) ......