金熠蓉，储 屹，吴开春，梁 洁

    (空军军医大学西京医院消化内科，肿瘤生物学国家重点实验室，国家消化系疾病临床研究中心，陕西 西安 710032)

    随着结肠镜检的逐渐普及和结直肠癌治疗策略的不断改进，结直肠癌的发病率较往年有所下降，但其仍是世界范围内癌症死亡的第三大常见原因[1]。 众所周知，增殖是肿瘤最显著的恶性生物学行为之一，也是肿瘤发生发展的重要起始原因[2]，致癌基因不断累积，抑癌基因逐渐失活，共同产生的累积效应促使肿瘤持续发展[3]。在此过程中，肿瘤细胞的分子组成和表型特征不断改变，使肿瘤细胞在原发部位不断生长增殖，并最终扩散、定植到远处器官[1]。因此，全面阐明结直肠癌细胞增殖相关分子异常表达的因果机制，有助于开发新的癌症治疗方法，改善患者预后。

    Sec62是一种内质网跨膜蛋白。在生理情况下，其作用是将新生合成的前体多肽以Sec复合物的形式转移到内质网中进行加工[4]。Sec62是Sec复合物基团中最小的成员，其Mr约为45 900，包含两个跨膜螺旋结构域[5]。最新研究表明，真核细胞中Sec62参与了短的分泌蛋白和跨膜前体蛋白的翻译后转运[6]，并在其中发挥重要的调控作用。同时钙依赖介导的Sec复合物的构象改变能引起内质网内钙离子通过Sec61通道外流进入胞质，Sec62 所具有的2个假定胞质EF手型蛋白结构域能阻止这一过程的发生，从而对内质网钙离子浓度发挥调节作用[7]。目前在肿瘤方面的研究已证实Sec62在前列腺癌[8]、胃癌[9]、肝癌[10]、乳腺癌[11]、肺癌[12]中广泛高表达，且能促进多种肿瘤恶性生物学行为，例如Sec62在肿瘤耐药[13]、转移[14]、促血管生成[15]等方面均发挥促进作用，但其在结直肠癌增殖过程中的作用目前仍未可知。因此，本研究旨在通过Western blotting、流式细胞术以及构建裸鼠皮下移植瘤模型等系列增殖相关实验方法，探究Sec62在结直肠癌细胞增殖中可能发挥的作用及其潜在分子机制，从而为结直肠癌临床治疗提供潜在的治疗靶点。

    1 材料与方法

    1.1 材料

    永生化正常结肠上皮细胞(FHC)和人结直肠癌细胞(HCT116、RKO、HCT8、HCT15、SW480、DLD-1)均保存于实验室液氮中，供实验所需。DMEM培养基，PBS缓冲液(美国Corning公司)；opti-MEM培养基(美国Thermo Fisher公司)；胎牛血清(美国Gibco公司)；过表达和敲减Sec62的慢病毒及其对照(上海吉凯基因科技有限公司)；2.5 g/L胰酶(美国Merck Millipore公司)；CCK-8试剂盒(上海翊圣生物科技有限公司)；结晶紫(索莱宝公司)；兔抗Sec62抗体(ab140644 ......