武秀权，吕伟豪，费晓炜，吴 霜，何 鑫，豆雅楠，郇 宇，贾 博，费 舟

    (空军军医大学西京医院神经外科，陕西 西安710032)

    创伤性脑损伤(traumatic brain injury，TBI)作为临床上常见的急危重症之一，其致死率和致残率均较高[1]。TBI的核心是神经元损伤，大量的神经元损伤导致后期神经功能缺失。TBI包括原发性脑损伤和继发性脑损伤，临床医务人员的主要任务是防治继发性脑损伤[2]，因而，针对继发性损伤防治的新方法一直是研究的热点。

    铁死亡是近年发现的一种独特的细胞死亡模式，不同于凋亡、坏死及自噬性死亡，该过程没有核形态变化、DNA片段化和胱天蛋白酶活化，也不能被其他细胞死亡抑制剂所逆转[3]。研究证实，铁死亡与神经退行性疾病和急性神经损伤背景下的神经元转归密切相关[45]。然而，有关TBI后神经元铁死亡信号改变及作用的报道较少，相关机制有待进一步阐明。

    Parkin是与神经退行性疾病密切相关的一个蛋白质分子，其突变会导致早发性帕金森病，本质是一种E3泛素连接酶，广泛参与细胞内线粒体自噬、蛋白降解及转录调控等过程[6]。研究表明，Parkin可在急性缺血性卒中发挥神经保护作用[7]，而其与TBI的关系尚未阐明。因此，本研究利用小鼠原代皮层神经元机械性损伤模型，探究伤后Parkin的表达、作用及其对铁死亡信号的调控机制。

    1 材料与方法

    1.1 材料

    C57BL/6孕鼠(孕15～16 d)32只由空军军医大学实验动物中心提供。动物饲养于23～25 ℃恒温环境中，光照条件为12 h黑暗/12 h光照连续循环，给予小鼠充足水和食物。处理动物严格遵守空军军医大学实验动物中心制定的实验动物使用指南。

    1.2 方法

    1.2.1 原代皮层神经元培养 取孕15～16 d C57BL/6小鼠1只，脱臼处死后，严格无菌操作，逐层小心剪开皮肤皮下组织、腹膜，分离胎盘胎鼠，收集胎鼠脑组织。显微镜下去除脑膜，分离皮层，并转移至预冷培养基中。用虹膜剪剪碎皮层，加入适量2.5 g/L胰酶溶液，混匀后放置于细胞孵箱，消化20～25 min，每隔5 min摇动培养皿1次。将消化过的皮层组织与适量培养基混匀，并通过75 μm细胞筛网，收集细胞悬液。调整细胞密度，种板。4～6 h后，用含B27的Neurobasal培养基给神经元换液，并每隔2～3 d换液 ......