谷氨酰胺代谢受损的巨噬细胞抑制内皮细胞的增殖和迁移
新生,1材料和方法,2方法,2结果,1HUVECs增殖能力检测,2HUVECs迁移能力检测,3HUVECs成管能力分析,4巨噬细胞敲除GLS抑制HUVECs功能的分子机制,3讨论
王 靖,白 皓,王新力,张思琦,王天吉,冯亚非,雷 伟(空军军医大学西京医院骨科,陕西,西安 710032)
血管新生对于组织的损伤修复至关重要[1],而其本身也受到损伤周围环境等多种因素的调控[23]。其中,单核巨噬细胞在损伤早期即被募集到损伤周围,而再生修复阶段的巨噬细胞将分泌多种促血管生成因子调控血管新生,如碱性成纤维细胞生长因子、血小板源性生长因子等[4]。巨噬细胞的功能状态对于血管新生及组织的损伤愈合至关重要。研究表明,促炎表型(M1型)的巨噬细胞将抑制血管新生[5],而抗炎表型(M2型)的巨噬细胞则可通过分泌血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)促进血管新生[6],但巨噬细胞调节血管再生的关键机制尚不清楚。
谷氨酰胺是血浆中最丰富的非必需氨基酸,是组织内重要的氮、碳和能量运输载体[7]。研究发现,巨噬细胞消耗大量的谷氨酰胺,谷氨酰胺代谢降低将影响巨噬细胞极化并导致炎性因子分泌增多,补充谷氨酰胺可以改善巨噬细胞促炎/抗炎表型失衡并抑制炎性因子的分泌,从而促进肌肉组织再生[810]。但谷氨酰胺代谢异常的巨噬细胞能否影响人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)的增殖和血管新生功能尚不清楚。因此,本实验旨在明确谷氨酰胺代谢异常的巨噬细胞对HUVECs增殖、迁移和成管能力的影响,并初步探讨其机制。
1 材料和方法
1.1 材料
Esco Airstream生物安全柜(ESCO公司,新加坡);细胞培养箱(Thermo公司,美国);FLUOstar Omega全自动多功能酶标仪(BMG LABTECH公司,德国);HUVECs(赛百慷生物技术股份有限公司,中国);低糖DMEM培养液(Hyclone公司,美国);胎牛血清、CCK-8试剂盒(InCellGene公司,美国);巨噬细胞集落刺激因子(macrophage-colony stimulating factor ......
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