全惠琳，郇 宇，胡学昱

    (空军军医大学西京医院：1骨科，2神经外科，陕西 西安 710032)

    下腰痛是骨科最常见的疾病之一，该病常常影响患者的生活和工作，治疗棘手且花费巨大[1]。椎间盘退变(intervertebral disc degeneration，IDD)作为下腰痛最主要的病因之一[2]，其致病因素尚不明确，缺乏有效的治疗措施且目前无法根治。椎间盘作为脊柱单元中重要的承受力结构，由中心的髓核(nucleus pulposus，NP)、外围的纤维环(annulus fibrosus，AF)和终板软骨(cartilage endplate，CEP)共同组成“夹心饼干”样结构[3]。大量研究表明CEP是椎间盘的营养运输路径，是IDD重要的治疗靶点。软骨细胞是CEP的主要细胞类型，包埋在细胞外基质中，由胞膜的整合素家族蛋白(尤其是整合素β1)与细胞外基质的配体(如纤维粘连蛋白、层粘连蛋白、Ⅱ型胶原等)介导细胞与细胞外基质连接[48]，其中Ⅱ型胶原是CEP细胞外基质的主要成分之一[910]，可能是CEP退变中结合整合素的重要角色。CEP退变与吸烟、异常生物力学负荷、感染等因素相关[1]，在IDD过程中外周血管入侵CEP，促进IL-6、IL-8、TNF-α等因子释放[1112]，已被认为是导致IDD最主要的损伤因素之一。但是，这些细胞因子导致CEP退变的机制尚不可知。因此探索炎性因子诱导CEP退变的发病机制、寻求潜在治疗手段势在必行。褪黑素具有抑制椎间盘炎症的功能，可以促进IL-1β和TNF-α诱导的退变NP细胞的细胞外基质合成，抑制NP细胞凋亡[1314]，但具体机制仍在探索阶段，而且褪黑素对CEP细胞与细胞外基质的相互作用影响方面也缺乏相关研究。本研究拟从细胞与细胞外基质相互作用的角度出发，探讨褪黑素对IL-1β/TNF-α诱导CEP退变的治疗作用和机制 。

    1 材料与方法

    1.1 材料

    整合素β1(sc-374429，Santa Cruz Biotechnology，美国)；Ⅱ型胶原(ab34712，Abcam，英国)；β-actin(66009-1-Ig，Proteintech，美国)；ki67(ab15580，ab16667，Abcam，英国)；Western blotting 二抗(7076，7074，CST，美国)；荧光二抗(Alexa Fluor 488/594 ......