周月媛，冯东林，叶俊秋，吴孟晗，彭陈瑾，王昭维，李 萌，张英起，何 磊

    (空军军医大学药学系生物制药学教研室，陕西 西安 710032)

    近年来，以免疫检查点抑制为主的肿瘤免疫治疗在基础研究和临床试验中不断取得突破性成果[1-2]。肿瘤免疫治疗已成为继手术、放疗、化疗之后的第四种肿瘤治疗手段，但存在药物应答率低、自身免疫反应毒性大、易产生耐药性等问题[3-4]。目前，寻找新的免疫治疗靶点是提高患者反应率的重要途径。生长分化因子15(growth differentiation factor 15，GDF15)是转化生长因子β超家族的成员之一，在正常生理调节下表达水平低，但在炎症性疾病、恶性肿瘤和妊娠等特殊状态时显著上调[5-7]。其主要功能是参与能量稳态、体质量调节等生物学过程[8-11]，而在抗肿瘤免疫反应中的研究较少[12-14]。

    本课题组近年聚焦于GDF15的抗肿瘤免疫作用和分子机制研究，发现其对多种免疫细胞的抑制性表型具有促进作用。若抑制GDF15的活性，可能会缓解肿瘤的发生发展。本研究通过生产制备GDF15单克隆抗体并分析其抑制肿瘤生长的功效，为以GDF15为靶点的人源化单克隆抗体研发奠定理论基础。

    1 材料与方法

    1.1 材料

    1.1.1 细胞株 骨髓瘤细胞系SP20、人T淋巴母细胞系Jurkat均购于中国科学院细胞库(上海)，并由本科室长期保存使用。人原代CD4+T细胞分离自健康人外周血单个核细胞，健康人血液来源于空军军医大学西京医院输血科，鼠CD4+T细胞由小鼠脾脏分离获得。

    1.1.2 实验动物 BALB/c小鼠和C57BL/6小鼠由空军军医大学实验动物中心提供，饲养于科室专业动物房。本研究已通过空军军医大学实验动物伦理委员会批准(许可证号：IACUC-20200152)。

    1.2 方法

    1.2.1 杂交瘤细胞的制备 采用的抗原GDF15为商品化可溶性蛋白(9279-GD)，将其与弗氏佐剂按1∶1混合，多点注射免疫BALB/c小鼠3次，每次间隔3周，最后1次注射3 d后，采用吸入CO2方式处死小鼠，取出脾脏，分离得到B淋巴细胞。提前培养SP20细胞，与B淋巴细胞混合，离心后加入500 mL/L PEG (Mr4 000)，搅拌30 s，加入培养基离心后用RPMI 1640重悬培养于37 ℃细胞培养箱。采用ELISA检测杂交瘤培养体系上清液，用PBS作为对照，筛选出阳性杂交瘤细胞。通过在96孔板中的有限稀释法 ......