樊 珍，王丽芳，王立伟，陈丽新，张海峰

    (1西安市精神卫生中心心理科，陕西 西安 710061；2西安交通大学转化医学研究院遗传与发育研究所，陕西 西安 712000；3西安循证医药研究院，陕西 西安 710003；4暨南大学基础医学院生理学系，广东 广州 510632)

    在机体发育、免疫应答、伤口愈合、肿瘤侵袭转移等过程中，细胞膜边缘形成的突起是驱动细胞移动的关键步骤[1-2]；在神经突起生长过程中，神经元胞体在特定部位形成的突起，亦是轴突和树突形成的关键[3-4]。突起依据形态特征可分为片状伪足和丝状伪足，片状伪足主要负责细胞爬行，而丝状伪足作为感受器主要负责探测外界信号。突起是细胞局部体积可控性增大的过程，在多种膜成分(包括水通道和离子通道)参与下，以微丝或微管骨架蛋白为结构基础的细胞变形过程[5-7]。示踪标记这些生物大分子，对研究突起形成机制具有重要意义。

    原子力显微镜(atomic force microscope，AFM)是一种纳米级高分辨率的扫描探针显微镜，其纳米级探针固定在可灵敏操控的微米级弹性悬臂上，当探针与待测样品距离相当近时，探针顶端原子与样品表面原子间产生的作用力会使悬臂弯曲偏离原来的位置，依据探针偏离量或振动频率构建三维图像，就能间接获得样品表面形貌或原子成分[8]；扫描探针表面修饰生物活性物质，如抗体，或胶体金标记生物样本后再行探针扫描，可用来分析生物样本表面抗原特征等[9-11]。然而，通过商品化途径，获取可识别膜蛋白胞外段的单克隆抗体往往存在一定困难，且制备单抗过程复杂、周期长。因此，本实验拟以水通道3(aquaporin-3，AQP-3)为研究对象，通过构建AQP-3/血凝素(hemagglutinin，HA)标签融合载体，胶体金标记HA标签蛋白后，利用AFM分析AQP-3在细胞膜上的分布特征。

    1 材料与方法

    1.1 材料

    细胞培养液RPMI 1640(31800-022)和新生牛血清(16010-159)购自美国Gibco公司，青霉素(P3032)和链霉素(S9137)购自美国Sigma公司。引物均由上海生工生物技术有限公司合成。XhoⅠ(XHO-101)和EcoRⅠ(ECO-111)限制性内切酶购自日本Toyobo公司 ......