黄义源，杨 亮，袁 洁，智 娜，刘育明，张 明，赵湘辉

    (1延安大学生命科学学院多肽资源药物研究中心，陕西省区域生物资源保育与利用工程技术研究中心，陕西 延安 716099； 2西北大学生命科学学院，陕西 西安 710127； 3空军军医大学基础医学院神经生物学教研室，陕西 西安 710032)

    近年来，各种神经连接介观图谱成像技术不断发展成熟，不但为探索神经和精神疾病的发生机制提供了重要的理论和方法，更成为脑功能成像大数据共享和开放式脑科学研究的热点[1]。其中，基于组织透明化的高分辨显微成像技术在探索神经连接介观图谱特征与神经系统功能异常的关系中发挥重要作用[2-3]。组织透明化的方法不但可以在不破坏神经纤维间联系的基础上实现对一定厚度，甚至全脑的单细胞分辨率介观尺度成像，还可以与包括免疫荧光化学在内的多种细胞标记方法相匹配，从三维立体的空间层面实现对脑区间神经联接的长程投射和局部微环路解析[4-5]。现阶段透明化的方法大致可分为三类：溶剂透明技术、水性超水合技术和水凝胶包埋技术[6-7]。不同的方法原理不同，在透明清除时间、荧光保存效果、组织是否形变、是否和免疫荧光技术兼容、适用组织厚度等方面侧重不同[8-10]。本研究以小鼠厚脑片(150 μm)为研究对象，通过对上述要素的比较，探讨了基于水凝胶包埋的PACT(passive CLARITY technique)[11-12]、基于尿素透明化技术改进的MACS(MXDA-based Aqueous Clearing System)[13]和基于溶剂透明技术的Visikol HISTO[14]试剂盒三种方法的优势与缺点，将为相关领域研究人员选择操作简便、兼顾免疫荧光标记方法、能处理一定厚度的组织且基本不发生形变、处理时程较短，而且重复性好的方法提供参考。

    1 材料与方法

    1.1 材料

    实验动物：本研究中所使用的动物在空军军医大学实验动物中心SPF级动物房饲养，保持室内温度24 ℃左右，相对湿度维持在50%左右，照明为12 h光/12 h暗循环。转基因小鼠品系为CNP-mEGFP[15]，GAD67-GFP[16](RRID:IMSR_JAX:007677),Tir2CreER[17](RRID:IMSR_JAX:030597)和TdTomato[18](RRID:IMSR_JAX:007905)。将Tir2CreER小鼠与TdTomato小鼠交配获得Tir2CreER-TdTomato转基因鼠，诱导该小鼠表达Tir2Cre时 ......