张晓雁，徐丽群，张丽君，唐 浩，李 萌，孙 权，薛 桐，胡泽兵，曹新生，石 菲，张 舒

    (空军军医大学航空航天医学系航空航天生物动力学教研室，航空航天医学教育部重点实验室，陕西 西安 710032)

    航天失重环境打破骨形成和骨吸收之间的平衡，导致严重的骨质丢失[1]。研究表明骨内微血管在骨稳态中发挥关键作用，血管生成先于骨形成，是骨化的先决条件；此外，骨内微血管是骨与邻近组织的沟通网络，提供营养物质，清除代谢废物，表明血管生成和骨形成之间存在紧密的时空联系，这种联系被称为“血管-成骨耦联”[2]。骨内微血管及血管生成减少可导致骨形成障碍，骨量减少，骨折愈合能力降低[2]。已有文献报道模拟失重下微血管内皮细胞可调控成骨细胞功能[3]，但具体机制尚未阐明。外泌体是一种直径为30～150 nm、具有脂质双分子层的膜性囊泡，可通过转运核酸、蛋白质和其他调控因子到受体细胞中发挥调控作用，参与体内免疫应答、骨重建、血管生成等多种生理活动[4-5]。在骨重塑微环境中，外泌体可向成骨细胞递送微小RNA(microRNA，miRNA)进而影响骨形成[6]。miRNA是一类由约22个核苷酸组成的非编码RNA，与靶基因的mRNA特异性结合，在转录后水平参与调控基因表达，以调节多种生物学过程[7]。本课题组研究发现，miRNA可参与调控成骨细胞功能，如miR-132-3p、miR-139-3p、miR-320-3p等[8-10]。前期，我们对模拟失重下微血管内皮细胞源外泌体进行了miRNA芯片分析，结果显示模拟失重组外泌体内miR-223-3p表达丰富。文献[11]报道miR-223-3p可参与调控骨髓间充质干细胞的成骨分化。本研究拟在前期工作基础上，以小鼠微血管内皮细胞系bEnd.3细胞和小鼠前成骨细胞系MC3T3-E1细胞为研究对象，探究模拟失重下微血管内皮细胞通过外泌体转运miR-223-3p是否可调控成骨细胞分化功能。该研究将有助于从“血管-成骨耦联”的角度，深化对失重性骨质丢失发生机制的认识，为失重性骨质丢失防治提供新的干预靶点。

    1 材料与方法

    1.1 材料

    小鼠微血管内皮细胞系bEnd.3(中国科学院上海细胞库)，小鼠前成骨细胞系MC3T3-E1(中国科学院上海细胞库)，DMEM培养基、α-MEM培养基、胎牛血清、青-链霉素双抗、胰蛋白酶(Gibco公司)，2D回转器(中国航天员科研训练中心)，mimic-223-3p、inhibitor-223-3p及相应的阴性对照(上海吉玛制药技术有限公司) ......