张 虹，张 玄，陶开山，窦科峰

    (空军军医大学西京医院肝胆外科，陕西 西安 710032)

    异种移植是解决同种器官移植供体短缺的有效策略之一。近年来，猪器官的应用为心脏、肾脏、胰岛等临床前异种移植的发展提供了重要的器官来源[1]。目前原位猪肾脏异种移植受体和异位猪心脏异种移植受体最长存活时间分别达到499 d和945 d，说明临床前猪器官异种移植研究已初具规模[2]。然而，免疫排斥反应、炎症和凝血功能障碍以及猪病毒的跨物种传播风险是影响异种移植发展的关键性问题。随着基因工程技术的快速发展和有效免疫抑制剂的出现，通过对供体猪进行基因改造和使用免疫抑制剂能够减轻受体免疫排斥反应和炎症及凝血障碍，延长异种受体的存活时间[3]。但猪器官的移植是否会引起人畜共患病微生物的跨物种传播，是异种移植发展中人们关注的热点问题。其中猪内源性逆转录病毒(porcine endogenous retrovirus，PERV)整合在猪基因组中，被认为是风险等级最高的病毒[4]。

    PERV是由核心蛋白gag、聚合酶pol和包膜蛋白env基因组成编码区的RNA逆转录病毒，在体外能够感染多种动物或人的细胞，并通过遗传传播[5]。感染性的PERV分为3个亚类：多嗜性的PERV-A和PERV-B以及嗜生态性的PERV-C。PERV-A和PERV-B在所有猪中均表达，并能感染不同物种细胞；而PERV-C仅在部分猪中表达，且只能感染猪细胞[6]。PERV-A和PERV-C会形成具有强复制和特异性突变能力的重组体PERV-A/C，整合在动物和人类细胞的基因组中[7]。此外，也有研究证明PERV在不同的组织器官中存在差异表达[8]。2019年，HEO等[9]研究发现异种肾脏移植术后受体膀胱中检测到PERV序列，插入实验证实受体中的PERV来源于供体猪细胞，采用猪特异性线粒体细胞色素B基因检测也证实了异种移植术后受体膀胱中存在猪细胞。因此，为了提高异种移植的安全性，选用PERV失活的供体或对移植受体进行广泛检测具有重要意义。现已有多种技术用于失活PERV，如同源重组、锌指核酶和CRISPR/Cas9等[10]。但PERV失活的供体移植后是否已完全失去遗传因素引起的病毒感染性，在移植过程中也需要进行实时监测。本研究以6-基因编辑猪-恒河猴异种肝肾联合移植样本为研究对象，检测异种移植过程中供受体不同组织中PERV基因的表达，期望为PERV的跨物种传播提供一定的理论基础。

    1 材料与方法

    1.1 材料 ......