李 萌，张 舒，胡泽兵，孙 权，徐丽群，张正祥，石 菲

    (1延安大学医学院，陕西 延安 716099；2空军军医大学航空航天医学系航空航天生物动力学教研室，航空航天医学教育部重点实验室，陕西 西安 710032)

    航天实践和地面研究已证实，失重和模拟失重可诱导多种免疫反应，对机体的固有免疫和特异性免疫均产生不利影响[1]。免疫系统是航天飞行中受影响最严重的系统之一。免疫功能的下降增加了航天员机体发生感染、肿瘤、过敏和自身免疫性疾病等的可能性[2]。目前，免疫功能下降的机制尚未被完全阐明，而免疫细胞对微重力环境异常敏感。重力的改变可以通过不同的机制影响免疫细胞的多个方面[3]。先天免疫细胞作为人体免疫防御的第一道防线，在识别和清除抗原异物、保护机体免受外界侵袭等方面发挥着重要作用[4]。巨噬细胞作为重要的先天免疫细胞，具有细胞吞噬、抗原呈递和细胞因子分泌的功能，可影响炎症反应、组织重塑和修复，是先天免疫功能的主要执行者[5]。但在航天失重环境下，巨噬细胞的功能变化特点研究一直没有得到足够重视。因此，本研究拟借助2D回转器模拟失重生物效应，探讨模拟失重对小鼠巨噬细胞生物学功能的影响，为深化失重下人体免疫功能抑制机制研究提供理论依据和数据支撑。

    1 材料与方法

    1.1 材料

    小鼠白血病病毒诱发的肿瘤巨噬细胞RAW264.7(中国科学院上海细胞库)，DMEM培养基、青-链霉素双抗(美国Gibco公司)，胎牛血清(以色列VivaCel公司)，2D回转器(中国航天员科研训练中心)，Transwell小室(8 μm孔径，美国康宁公司)，CCK-8试剂(西安米鼠生物公司)，EdU-594细胞增殖检测试剂盒、活性氧(reactive oxygen species，ROS)检测试剂盒、结晶紫染液(上海碧云天公司)，酶标仪(美国Bio-Rad公司)。

    1.2 方法

    1.2.1 细胞培养 冷冻保存的RAW264.7小鼠巨噬细胞在复苏后，使用含有100 mL/L胎牛血清和10 mL/L青-链霉素双抗的DMEM培养基进行常规细胞培养。将细胞放置于37 ℃恒温箱，保持50 mL/L CO2浓度，并每日更换培养基1次。当细胞汇合度达到约80%时，使用细胞刮刀进行传代处理。选取复苏后3～6代处于对数生长期的细胞进行后续实验。

    1.2.2 细胞模拟失重实验 利用2D回转器模拟失重环境，进行细胞培养实验。将RAW264.7细胞接种于25 cm2专用回转培养瓶中，每瓶细胞密度为1×105 ......