麝香酮对大鼠脊髓损伤的保护研究(1)
[摘要]：研究麝香酮对大鼠脊髓损伤有无保护作用。方法：将大鼠随机均分为5组：生理盐水组、甲基强的松龙组、M01、MO2M03组。采用改良艾伦法建立大鼠脊髓损伤模型。大鼠给予麝香酮(MO1：2.5mg/kg，MO2：5mg/kg，MO3：10mg/kg)或甲基强的松龙(MP：30mg/kg)或等量的生理盐水。连续观察4周，ELISA法检测SOD、MDA、IL-1β，HE、nissl染色进行病理学观察。结果：不同浓度的麝香酮对免疫炎症反应、神经元坏死和凋亡均有抑制作用，MOX组下肢功能恢复优于NS组和MP组。MO2比其他组更显著。结论：麝香酮具有抗炎、抗凋亡作用，可减轻脊髓损伤后继发性损伤，为大鼠神经再生提供有利条件。
[关键词]：抗炎药;星形胶质细胞;胶质纤维酸性蛋白;脊髓损伤
[中图分类号]R453 [文献标识码]A [文章编号]2107-2306(2020)04-062-02
创伤性脊髓损伤(SCI)的发病率有逐渐升高的趋势"。SCI及其继发性损伤可直接导致神经功能损伤，出现不同程度的功能障得，并且脊髓损伤治疗困难!，因此致残率与致死率非常高，不仅患者带来不便和痛苦，也给社会和家庭带来了沉重的负担”。目前SCI的治疗仍是医学的一大难题，SCI的实验研究也是医学研究的热點。
本实验中观察麝香酮对急性脊髓损伤大鼠脂质过氧化产物MDA、SoD、炎症因子IL-1β及病理学及行为学进行观察统计分探讨麝香酮对神经元及星形胶质细胞在抗炎方面的作用。
1实验动物
清洁级SD(Sprague-Dawley)雌性大鼠120只(由重庆医科大学实验动物中心提供)。随机分成五组，生理盐水组(NS组)甲基强的松龙组(MP组)、麝香酮注射液尾静脉注入组(MO组分3小组：MO1-3组)。MO1组、MO2组、MO3组为脊髓损伤后立即分别从尾根静脉注入2.5mg/kg、5mg/kg、10mg/kg的麝香酮，持续7天;MP组术后立即注入30mg/kg的甲基强的松龙;NS组则注人等量生理盐水。
2建立大鼠急性脊髓背侧损伤模型(Allen's法[1])
用4%水全氯醛，以0.35ml/kg行腹腔注射麻醉。其俯卧位固定，腰背部脱毛，典伏消毒铺巾，以T9棘突为中心作长约2.5cm切口，显露棘突及椎板，咬除T8-9棘突及全椎板，显露脊髓，采用Allen氏重物坠落装置撞击脊髓背侧，即将质量为10g的重锤从距脊髓2.5cm高度垂直沿中空钢管垂直自由落下撞击硬脊膜密切接触，直接传递给脊髓。(图1)
3取材
在相应时间点(术后3h、8h、ld、3d、1w、2w)，每组随机取3只动物，麻醉动物后在大鼠的外眦取血约lml。孵化、离心后吸取于PV管内立即放于-20度的冰箱在检测时取出。采用酶联免疫吸附剂测定对脂质过氧化产物丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)及白介素1B(L-1B)。
4统计
采用SARS9.0统计软件包进行分析，所有数据以x+s表示，组间比较采用单因素方差分析，P值<0.05为有统计学意义。
5结果
5.1成功了急性脊髓损伤模型
采用Allen'S法成功建立了急性脊髓损伤模型(打击脊髓后鼠尾痉挛性摆动数次，双下肢及躯体回缩样扑动，后双下肢呈弛缓性瘫痪，大鼠麻醉苏醒后双下肢无活动，均需每天人工挤尿两次)(图1a/b)
5.2酶联免疫吸附剂测定(ELISA)
5.2.1SOD检测
从建模后3小时至1周，NS组SOD出现下降趋势，从180.87ng/L降到152.85ng/L，在2周时出现上升达175.93ng/L。MP组与麝香酮处理的3个组，明显高于NS组，都从3小时逐渐上升，在术后3天达顶峰，以MO3组最为明显达289.45ng/L。后出现下降在2周时最明显，以MO1组最达184.38ng/L，MP组次之。(图2)
5.2.2MDA检测
从建模后3小时至1周，NS组MDA缓慢上升趋势，从3.6ng/L升到4.37ng/L，在2周时出现下降达4.18ng/L。MO1和MO2在从术后3小时至3天出现了上升趋势，较其它3组低，以MO2最低，从2.35ng/L升至3.13ng/L，后出现了缓慢下降，以M02下降最低，达2.28ng/L。(图3)
5.2.3IL-1β检测
从术后3小时至1天，NS组IL-B出现缓慢上升趋势，从66.59ng/L升到75.55ng/L，在2周时缓慢下降53.75ng/L。其余四组在同一时间点较NS组低，3小时MP组最低为37.34ng/L;2周时MO2组最低，1周时达顶峰，以MO3组相对最高，达62.49ng/L(图4)。
5.3病理学检查
5.3.1HE染色法
在建模后8小时400倍光镜下能见以生理盐水组红细胞最明显，甲强龙组次之，在麝香酮5mg组出血较少。1天时组织溶解明显，从重到轻的顺序为生理盐水组，甲强龙组，麝香酮2.5mg组，组10mg组，麝香酮5mg组。3天时，生理盐水组脊髓组织溶解，形成空洞;麝香酮2.5mg组出现了空洞，并增生出现，但较生理盐水组好。一周、二周时脊髓组织广泛胶质细胞增生，同一天的顺序。四周时脊髓组织胶质细胞增生甲强龙组仍见散在的小的空洞存，在3个剂量麝香酮所处理的脊髓空洞基本消失，为胶质细胞所充填(图5-6)。
5.3.2尼氏染色(Nissl染色法)
在400倍光镜下8小时五个实验组不同程度的出现的胶质细胞增生，生理盐水组较多，较小的神经元。1天时胶质细胞出现增生，生理盐水组明显，甲强龙组次之，麝香酮以5mg组增生较少，多个较小的神经元。3天时麝香酮处理的3组胶质细胞增生较前两组少，在这三组中以5mg组较少。一周时胶质细胞明显增生，生理盐水组最多，麝香酮处理的3组胶质细胞增生较前两组少，5mg组较少，各组可见多个较小的神经元。两周时生理盐水组胶质细胞显著最多，以2.5mg组增生明显。四周胶质细胞增生5mg组较少，各组可见多个较小的神经元(图6-7)。, http://www.100md.com(郭亮 桂菲 李睿夫 于超 罗远盟)
[关键词]：抗炎药;星形胶质细胞;胶质纤维酸性蛋白;脊髓损伤
[中图分类号]R453 [文献标识码]A [文章编号]2107-2306(2020)04-062-02
创伤性脊髓损伤(SCI)的发病率有逐渐升高的趋势"。SCI及其继发性损伤可直接导致神经功能损伤，出现不同程度的功能障得，并且脊髓损伤治疗困难!，因此致残率与致死率非常高，不仅患者带来不便和痛苦，也给社会和家庭带来了沉重的负担”。目前SCI的治疗仍是医学的一大难题，SCI的实验研究也是医学研究的热點。
本实验中观察麝香酮对急性脊髓损伤大鼠脂质过氧化产物MDA、SoD、炎症因子IL-1β及病理学及行为学进行观察统计分探讨麝香酮对神经元及星形胶质细胞在抗炎方面的作用。
1实验动物
清洁级SD(Sprague-Dawley)雌性大鼠120只(由重庆医科大学实验动物中心提供)。随机分成五组，生理盐水组(NS组)甲基强的松龙组(MP组)、麝香酮注射液尾静脉注入组(MO组分3小组：MO1-3组)。MO1组、MO2组、MO3组为脊髓损伤后立即分别从尾根静脉注入2.5mg/kg、5mg/kg、10mg/kg的麝香酮，持续7天;MP组术后立即注入30mg/kg的甲基强的松龙;NS组则注人等量生理盐水。
2建立大鼠急性脊髓背侧损伤模型(Allen's法[1])
用4%水全氯醛，以0.35ml/kg行腹腔注射麻醉。其俯卧位固定，腰背部脱毛，典伏消毒铺巾，以T9棘突为中心作长约2.5cm切口，显露棘突及椎板，咬除T8-9棘突及全椎板，显露脊髓，采用Allen氏重物坠落装置撞击脊髓背侧，即将质量为10g的重锤从距脊髓2.5cm高度垂直沿中空钢管垂直自由落下撞击硬脊膜密切接触，直接传递给脊髓。(图1)
3取材
在相应时间点(术后3h、8h、ld、3d、1w、2w)，每组随机取3只动物，麻醉动物后在大鼠的外眦取血约lml。孵化、离心后吸取于PV管内立即放于-20度的冰箱在检测时取出。采用酶联免疫吸附剂测定对脂质过氧化产物丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)及白介素1B(L-1B)。
4统计
采用SARS9.0统计软件包进行分析，所有数据以x+s表示，组间比较采用单因素方差分析，P值<0.05为有统计学意义。
5结果
5.1成功了急性脊髓损伤模型
采用Allen'S法成功建立了急性脊髓损伤模型(打击脊髓后鼠尾痉挛性摆动数次，双下肢及躯体回缩样扑动，后双下肢呈弛缓性瘫痪，大鼠麻醉苏醒后双下肢无活动，均需每天人工挤尿两次)(图1a/b)
5.2酶联免疫吸附剂测定(ELISA)
5.2.1SOD检测
从建模后3小时至1周，NS组SOD出现下降趋势，从180.87ng/L降到152.85ng/L，在2周时出现上升达175.93ng/L。MP组与麝香酮处理的3个组，明显高于NS组，都从3小时逐渐上升，在术后3天达顶峰，以MO3组最为明显达289.45ng/L。后出现下降在2周时最明显，以MO1组最达184.38ng/L，MP组次之。(图2)
5.2.2MDA检测
从建模后3小时至1周，NS组MDA缓慢上升趋势，从3.6ng/L升到4.37ng/L，在2周时出现下降达4.18ng/L。MO1和MO2在从术后3小时至3天出现了上升趋势，较其它3组低，以MO2最低，从2.35ng/L升至3.13ng/L，后出现了缓慢下降，以M02下降最低，达2.28ng/L。(图3)
5.2.3IL-1β检测
从术后3小时至1天，NS组IL-B出现缓慢上升趋势，从66.59ng/L升到75.55ng/L，在2周时缓慢下降53.75ng/L。其余四组在同一时间点较NS组低，3小时MP组最低为37.34ng/L;2周时MO2组最低，1周时达顶峰，以MO3组相对最高，达62.49ng/L(图4)。
5.3病理学检查
5.3.1HE染色法
在建模后8小时400倍光镜下能见以生理盐水组红细胞最明显，甲强龙组次之，在麝香酮5mg组出血较少。1天时组织溶解明显，从重到轻的顺序为生理盐水组，甲强龙组，麝香酮2.5mg组，组10mg组，麝香酮5mg组。3天时，生理盐水组脊髓组织溶解，形成空洞;麝香酮2.5mg组出现了空洞，并增生出现，但较生理盐水组好。一周、二周时脊髓组织广泛胶质细胞增生，同一天的顺序。四周时脊髓组织胶质细胞增生甲强龙组仍见散在的小的空洞存，在3个剂量麝香酮所处理的脊髓空洞基本消失，为胶质细胞所充填(图5-6)。
5.3.2尼氏染色(Nissl染色法)
在400倍光镜下8小时五个实验组不同程度的出现的胶质细胞增生，生理盐水组较多，较小的神经元。1天时胶质细胞出现增生，生理盐水组明显，甲强龙组次之，麝香酮以5mg组增生较少，多个较小的神经元。3天时麝香酮处理的3组胶质细胞增生较前两组少，在这三组中以5mg组较少。一周时胶质细胞明显增生，生理盐水组最多，麝香酮处理的3组胶质细胞增生较前两组少，5mg组较少，各组可见多个较小的神经元。两周时生理盐水组胶质细胞显著最多，以2.5mg组增生明显。四周胶质细胞增生5mg组较少，各组可见多个较小的神经元(图6-7)。, http://www.100md.com(郭亮 桂菲 李睿夫 于超 罗远盟)