赵 欣，左 琳，白英汉，刘博文，杨 强

    (沈阳兴齐眼药股份有限公司，辽宁 沈阳，110164)

    溶菌酶，又称胞壁质酶，是由 Fleming 于 1922 年首次发现的一种能够有效地溶解细菌的成分，广泛分布于眼泪、唾液、乳汁、心脏、肾脏等多种体液及器官组织中[1-3]。外眼直接暴露在含有各种病原微生物的环境中，泪液作为最外层屏障发挥着重要的抗感染防御作用。泪液中含有多种抗微生物的物质，例如溶菌酶、乳铁蛋白、β-溶素、免疫球蛋白、补体等。其中，含量最丰富的是溶菌酶，占泪液中蛋白质成分的 20%～40%[4]。泪液中溶菌酶的来源主要是泪腺细胞，含量约为 1～3 mg·mL-1，是血清中的上千倍[5]。已有研究表明，各种眼病患者泪液中溶菌酶水平会发生显著变化，如干燥性角结膜炎及干燥综合征可导致患者泪液中溶菌酶含量显著降低[6-7]；在烟雾、化学气体等污染环境中泪液中溶菌酶含量也有下降[8-9]；佩戴角膜接触镜人群泪液中溶菌酶含量也会显著降低[10]。泪液中溶菌酶的改变不仅对眼部疾病的诊断和治疗具有重要意义，也为补充溶菌酶进行治疗提供依据。

    溶菌酶滴眼液早在上世纪八十年代就已上市，具有抗菌抗炎作用，主要用于治疗慢性结膜炎。溶菌酶的作用机制：首先，通过水解β-1,4 糖苷键有效清除细菌细胞壁的肽聚糖，导致细胞壁不稳定；其次，通过其阳离子性质的机制，不依赖肽聚糖水解杀死细菌；同时，溶菌酶具有良好的生物相容性，不易产生耐药性[11-12]。不仅如此，近期研究表明，溶菌酶作为一种眼表宿主防御肽，除能保持眼部健康外，还可在疾病治疗中发挥巨大潜力[13]。如溶菌酶能减少角膜接触镜上白蛋白沉淀物，降低细菌感染的风险[14]；溶菌酶滴眼液不仅能有效缓解和改善干眼症，同时，能促进眼表损伤修复和抑制炎性反应，且效果优于玻璃酸钠滴眼液[15]。以上研究为溶菌酶滴眼液开拓新型适应症提供了基础。然而，关于溶菌酶滴眼液在眼内的药代动力学研究鲜有报道，药品说明书也缺少药代动力学研究的相关数据。相对于化学药而言，溶菌酶有分子量大、结构复杂、内源性物质干扰强等特点，故药代动力学研究需要灵敏度更高且特异性更强的定量检测方法。目前，测定溶菌酶常用的方法包括比浊法和平板扩散法。然而，这两种定量方法干扰因素较多，且重复性和灵敏度较差[16-17]。史瑾等人[18]分别采用 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法、免疫印迹法和反相高效液相色谱法测定兔眼房水中溶菌酶的浓度。但受这些检测方法灵敏度的限制，18 个样品中仅有 2 个被检出。本次研究建立灵敏度高且专属性强的酶联免疫吸附测定(Enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)法检测溶菌酶的浓度 ......