C-反应蛋白及临床应用.ppt
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参见附件(281kb)。
C-反应蛋白及临床应用
杨红玲
Protein Structure CRP结构
C反应蛋白的生理和生化
* 在细胞因子IL-6家族诱导下，CRP在肝中合
成迅速。
* 正常合成率为 l～10 mg/d，急性炎症时每
天合成超过 lg/d。
* 在急性相反应高峰时肝大量合成蛋白，其中
20%是合成CRP。
* 当IL-6刺激物缺乏时，在 2～4 h内合成率降
至正常。
* 循环中CRP半衰期约19h，但一旦它与配体结
合，可快速的被清除。
* 肝外合成对血清水平影响作用很小。
CRP的生物学功能
CRP的生物学功能-机理
* 结合坏死的内源性物质
在钙离子存在的情况下，CRP能结合坏死的内源性物质和效应细胞, 当正常的脂质双层结构被破坏致使内部磷脂暴露时，CRP可发生与宿主细胞的结合。
* 在系统性红斑狼疮的鼠模型中，注射CRP可改善SLE的状况。
- 人CRP基因的多态性导致的低基础水平表达增加了发生系统性狼疮的风险。
- CRP量的减少可能与SLE发病机理有关。
- CRP量的减少使结合的细胞碎片减少。
CRP的生物学功能-机理
* 结合外源性物质
- 细菌、真菌、寄生虫中的细胞壁磷酸胆碱。
- CRP具有保护机体抗细菌感染的能力。
- CRP 保护机体抵抗致命性的细菌脂多糖和各种炎症介子的能力。
CRP的生物学功能-机理
* 结合配体的CRP激活下列生物系统，导致配体的消除：
- CRP对补体系统的激活.
- CRP结合IgGFcR，增强自然杀伤细胞的活性。
- CRP的调理性质，调理即刺激细胞吞噬作用。
- CRP和血小板激活因子(PAF)结合 抑制PAF刺激的血小板聚集。
CRP的生物学功能-机理
* CRP具有多效性的作用。
- 当抑制干扰素的合成时 ，CRP可诱导IL-1受体拮抗剂而增加抗炎细胞因子IL-10的释放 .
- CRP也可诱导炎症反应。 CRP向上-调节内皮细胞粘附分子的表达，刺激许多细胞释放IL-8， 增加血浆纤维蛋白酶原催化剂抑制剂-1的表达和活性、增加IL-1, IL-6, IL-18, 和肿瘤坏死因子的释放.
* CRP诱导或抑制炎症反应依赖于环境。
CRP功能
* 识别和启动靶效应细胞及其产物并将其从组织中清除。
* 吞噬溶解入侵微生物。
急性相蛋白CRP合成的生物调控
* CRP基因位于1号染色体短臂，只有一个内含子，其分离编码信号肽的区域。
* 肝脏CRP合成的调节主要发生在转录阶段。由IL-6诱导，IL-1可增加此作用。
* CRP启动子最近区为STAT3 和 Rel 蛋白的结合部位。
* 这些因子的相互作用增加DNA 结合C/EBP家属成员的稳定性，从而有效地诱导了CRP基因的表达。
* 神经元细胞、动脉硬化斑块、单核细胞和淋巴细胞也可以合成CRP。在这些部位的调节机制还不清楚。
修饰的CRP(m-CRP) -"Modified" CRP
* 目前认为m-CRP是原CRP的单体。
* 与天然CRP不同,表现在分子大小,溶解度,抗原性,带电荷数等方面的差别.
* m-CRP具抗菌作用。
* m-CRP具有强大地诱发炎症的作用。
检测方法
方 法 灵敏度 参考献
试管内沉淀试验 - JExpMed1930;52∶561
毛细管内沉淀试验 10～20mg/L AmJMed1950;8∶445
改良平板双扩散法 10～20mg/L IntArchAllergy1962
改良琼脂柱扩散法 3.0mg/L ProcSocExpBiol1955
改良单扩散法 1.0mg/L ActaPatholMicrobiolScand
琼脂糖凝胶电泳法 1.0mg/L ClinChimActa1969
放射电免疫扩散法 10μg/L JClinLabInvest1973
补体结合试验 0.6mg/L ProcSocExpBiol1954
胶乳凝集试验 1.0mg/L Nature(London)1961
高敏乳胶增强浊度 0.35mg/ml Dade Germany2000
荧光抗体法 - Nature(London)1961
放射免疫测定法 3μg/L JLabClinMed1976
CRP检测方法 - 免疫沉淀试验
* 检测CRP原始方法.
* 将兔抗CRP血清吸入毛细管内。
* 把它浸入被测血浆或血清内,因毛细管虹吸作用被吸入,与抗CRP血清形成接触界面。
* 这种方法较粗糙,取得结果时间较长,也不太正确可靠.
CRP检测方法 - 免疫浊度法
* 可溶性CRP-Ag与可溶性抗CRP-Ab反应,形成可见的网络状沉淀性IC复合物点.
* IC复合物对光具有散射作用,使溶液具有肉眼尚不可见的浊度。
* 在被测样品中加抗血清后一定时间,测定反应系统散射光强度或浊度变化,可对被检物及其浊度加以检测。
* 根据仪器的光学系统,浊度法分为散射浊度法和透射浊度法两类。
* 许多自动化生化分析仪和自动化免疫测定仪都可CRP测定项目。
CRP检测方法 - 胶乳凝集试验(LAT)
* 将强化的兔抗CRP抗体固定于胶乳微粒上。
* 加入被测样品后与CRP在3分钟内形成肉眼可见的凝集物。
* 胶乳强化浊度法的灵敏度优于传统浊度法,试剂稳定性佳。
检测方法 - 标记免疫测定
* ELISA和免疫发光法和化学发光法等都可用于CRP的测定。
* 化学发光法的灵敏度和定量精确度可与RIA媲美,而无同位素污染,试剂稳定,分析速度快。
* CRP-POCT(床边试验)法- ELISA干片法。
- 把磷脂酰胆碱(PC)化学交联固定于载体。
- 被测CRP与载体的PC结合。
- 被酶标记的抗CRP单抗结合。
- 可灵敏、特异性检测CRP,约5分钟可得结果.。
检测方法 - 胶乳增强试验(shCRP)：
* 常规CRP检验方法可在感染或组织损伤时检测出CRP>10mg/L ......
C-反应蛋白及临床应用
杨红玲
Protein Structure CRP结构
C反应蛋白的生理和生化
* 在细胞因子IL-6家族诱导下，CRP在肝中合
成迅速。
* 正常合成率为 l～10 mg/d，急性炎症时每
天合成超过 lg/d。
* 在急性相反应高峰时肝大量合成蛋白，其中
20%是合成CRP。
* 当IL-6刺激物缺乏时，在 2～4 h内合成率降
至正常。
* 循环中CRP半衰期约19h，但一旦它与配体结
合，可快速的被清除。
* 肝外合成对血清水平影响作用很小。
CRP的生物学功能
CRP的生物学功能-机理
* 结合坏死的内源性物质
在钙离子存在的情况下，CRP能结合坏死的内源性物质和效应细胞, 当正常的脂质双层结构被破坏致使内部磷脂暴露时，CRP可发生与宿主细胞的结合。
* 在系统性红斑狼疮的鼠模型中，注射CRP可改善SLE的状况。
- 人CRP基因的多态性导致的低基础水平表达增加了发生系统性狼疮的风险。
- CRP量的减少可能与SLE发病机理有关。
- CRP量的减少使结合的细胞碎片减少。
CRP的生物学功能-机理
* 结合外源性物质
- 细菌、真菌、寄生虫中的细胞壁磷酸胆碱。
- CRP具有保护机体抗细菌感染的能力。
- CRP 保护机体抵抗致命性的细菌脂多糖和各种炎症介子的能力。
CRP的生物学功能-机理
* 结合配体的CRP激活下列生物系统，导致配体的消除：
- CRP对补体系统的激活.
- CRP结合IgGFcR，增强自然杀伤细胞的活性。
- CRP的调理性质，调理即刺激细胞吞噬作用。
- CRP和血小板激活因子(PAF)结合 抑制PAF刺激的血小板聚集。
CRP的生物学功能-机理
* CRP具有多效性的作用。
- 当抑制干扰素的合成时 ，CRP可诱导IL-1受体拮抗剂而增加抗炎细胞因子IL-10的释放 .
- CRP也可诱导炎症反应。 CRP向上-调节内皮细胞粘附分子的表达，刺激许多细胞释放IL-8， 增加血浆纤维蛋白酶原催化剂抑制剂-1的表达和活性、增加IL-1, IL-6, IL-18, 和肿瘤坏死因子的释放.
* CRP诱导或抑制炎症反应依赖于环境。
CRP功能
* 识别和启动靶效应细胞及其产物并将其从组织中清除。
* 吞噬溶解入侵微生物。
急性相蛋白CRP合成的生物调控
* CRP基因位于1号染色体短臂，只有一个内含子，其分离编码信号肽的区域。
* 肝脏CRP合成的调节主要发生在转录阶段。由IL-6诱导，IL-1可增加此作用。
* CRP启动子最近区为STAT3 和 Rel 蛋白的结合部位。
* 这些因子的相互作用增加DNA 结合C/EBP家属成员的稳定性，从而有效地诱导了CRP基因的表达。
* 神经元细胞、动脉硬化斑块、单核细胞和淋巴细胞也可以合成CRP。在这些部位的调节机制还不清楚。
修饰的CRP(m-CRP) -"Modified" CRP
* 目前认为m-CRP是原CRP的单体。
* 与天然CRP不同,表现在分子大小,溶解度,抗原性,带电荷数等方面的差别.
* m-CRP具抗菌作用。
* m-CRP具有强大地诱发炎症的作用。
检测方法
方 法 灵敏度 参考献
试管内沉淀试验 - JExpMed1930;52∶561
毛细管内沉淀试验 10～20mg/L AmJMed1950;8∶445
改良平板双扩散法 10～20mg/L IntArchAllergy1962
改良琼脂柱扩散法 3.0mg/L ProcSocExpBiol1955
改良单扩散法 1.0mg/L ActaPatholMicrobiolScand
琼脂糖凝胶电泳法 1.0mg/L ClinChimActa1969
放射电免疫扩散法 10μg/L JClinLabInvest1973
补体结合试验 0.6mg/L ProcSocExpBiol1954
胶乳凝集试验 1.0mg/L Nature(London)1961
高敏乳胶增强浊度 0.35mg/ml Dade Germany2000
荧光抗体法 - Nature(London)1961
放射免疫测定法 3μg/L JLabClinMed1976
CRP检测方法 - 免疫沉淀试验
* 检测CRP原始方法.
* 将兔抗CRP血清吸入毛细管内。
* 把它浸入被测血浆或血清内,因毛细管虹吸作用被吸入,与抗CRP血清形成接触界面。
* 这种方法较粗糙,取得结果时间较长,也不太正确可靠.
CRP检测方法 - 免疫浊度法
* 可溶性CRP-Ag与可溶性抗CRP-Ab反应,形成可见的网络状沉淀性IC复合物点.
* IC复合物对光具有散射作用,使溶液具有肉眼尚不可见的浊度。
* 在被测样品中加抗血清后一定时间,测定反应系统散射光强度或浊度变化,可对被检物及其浊度加以检测。
* 根据仪器的光学系统,浊度法分为散射浊度法和透射浊度法两类。
* 许多自动化生化分析仪和自动化免疫测定仪都可CRP测定项目。
CRP检测方法 - 胶乳凝集试验(LAT)
* 将强化的兔抗CRP抗体固定于胶乳微粒上。
* 加入被测样品后与CRP在3分钟内形成肉眼可见的凝集物。
* 胶乳强化浊度法的灵敏度优于传统浊度法,试剂稳定性佳。
检测方法 - 标记免疫测定
* ELISA和免疫发光法和化学发光法等都可用于CRP的测定。
* 化学发光法的灵敏度和定量精确度可与RIA媲美,而无同位素污染,试剂稳定,分析速度快。
* CRP-POCT(床边试验)法- ELISA干片法。
- 把磷脂酰胆碱(PC)化学交联固定于载体。
- 被测CRP与载体的PC结合。
- 被酶标记的抗CRP单抗结合。
- 可灵敏、特异性检测CRP,约5分钟可得结果.。
检测方法 - 胶乳增强试验(shCRP)：
* 常规CRP检验方法可在感染或组织损伤时检测出CRP>10mg/L ......
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