血小板血型基础与临床.ppt
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参见附件(143kb)。
血小板血型基础与临床
傅启华
主要内容
* HPA及其相关实验诊断
* 血小板血型的主要临床意义
* PTR的对策
血型
* 所有血液成分的遗传性标志。
血型的发现
* 红细胞血型：1900年，Landsteiner发现ABO血型。
* 血小板血型：1959年，Van Loghem发现Zwa血型。
* 白细胞血型：
1960年，Lalezari发现HNA
1965年，Bassuat发现HLA
血小板血型系统
* 血小板血型抗原主要有二大类
血小板相关抗原
血小板特异性抗原
血小板相关抗原
* 血小板表面存在的与其他细胞或组织共有的抗原 。又称血小板非特异性抗原或血小板共有抗原。
* 包括主要组织相容性抗原(HLA)和红细胞血型系统相关抗原 。
血小板表面的HLA抗原系统
* 血小板表面存在HLA-A、HLA-B和HLA-C位点等HLAⅠ类抗原 。
* 未发现血小板表面存在HLA-DR、HLA-DP和HLA-DQ等Ⅱ类抗原。
* 但是经过细胞因子的刺激，在血小板表面能产生HLA-DR抗原。
血小板表面的红细胞血型系统
* 血小板表面存在ABO、Lewis、I、i和P等红细胞血型系统抗原。
* 但不存在Rh、Duffy、Kell、Kidd和Lutheran等血型系统抗原。
血小板特异性抗原
* 人类血小板抗原(Human platelet antigen, HPA)
是位于血小板膜糖蛋白(glycoprotein，GP)上的抗原表位。
* 按发现时间顺序排列如下：Duzo、PlA(Zw)、PlE、Ko(Sib)、Bak(Lek)、Yuk(Pen)、Br(Hc、Zav)、PLT、Nak、Gov、Sr等等。
血小板特异性抗原系统国际命名
* 血小板特异性同种抗原系统一律命名为人类血小板抗原系统(HPA)。
* 不同的抗原系统按发现顺序用数字编号
* 对偶抗原按其在人群中频率由高到低，用字母命名，高的为a，低的为b 。
* 1990年被国际输血协会确认的血小板特异性抗原有5个系统共10种抗原，正式命名为HPA-1～HPA-5。
PNC
* 2003年国际输血协会(ISBT)和国际血栓和止血协会(ISTH)建立的血小板命名委员会(The Platelet Nomenclature Committee，PNC) 。
血小板特异性抗原的分子生物学
* 在已知其分子机理的22个血小板抗原中，其基因多态性大多是由于相应血小板膜糖蛋白结构基因中的SNP引起，而致相应位置的单个氨基酸变异所致，唯一的例外是HPA-14w。
* HPA-14w： 1909~1911delAAG
K611del
未命名的HPA
Vaa、Moua：前者被定位于GPⅡb/Ⅲa上， 后者尚未被定位。它们的等位基因结构多态性和蛋白结构多态性也也尚不了解故暂时未被归入HPA命名法。
Duzo抗原虽第一个被发现，但至今未发现第二例抗-Duzo，其所在糖蛋白、蛋白结构和基因结构多态性均未知。
血小板血型相关实验技术
* 近年来，随着分子免疫学、分子生物学的发展和各种标记技术(如流式细胞术、荧光显微镜、免疫电镜等)在医学领域的应用，血小板血清学检测方法有了很大进展，一些分子生物学技术也开始应用于血小板血型分型。
* 除血小板特异性抗原HPA外，血小板表面的HLA、ABO等抗原也具有重要临床意义。由于ABO血型可用相关红细胞方便地检测，故临床上对血小板血型的检测主要集中在HPA和HLA的检测上。
血清学试验
* 血小板免疫荧光试验(PIFT)
* 血小板固相微板技术：又称为固相红细胞粘附法(SPRCA)或混合细胞粘附试验(MRCA)
* 单克隆抗体特异的血小板抗原固定试验(MAIPA)
* 改进的抗原捕获酶联免疫吸附试验(MACE)
* 流式细胞仪检测技术(FCM)和珠子介导的血小板相关抗体检测法(LifeMatchTM Luminex100 screening assay)
* 微柱凝胶血小板定型试验
HPA基因分型
* 由于目前所知的大部分HPA等位基因多态性皆为单核苷酸多态性(SNP)，故HPA的基因分型方法与SNP检测方法类似 。
HPA基因分型方法
* PCR-RFLP ：Newman等(1989年)首先应用。 HPA-4(Yuk)和HPA-8(Sr)系统缺乏合适的酶切位点，不能直接使用此法进行分型。
* PCR-ASO ：Mcfarland等(1991年)首先将此技术用于HPA-1的分型。
* PCR-SSP ：Metcalfe和Waters等首先将此技术用于HPA-1的基因分型。
* PCR-SSCP ：Peyruchaud等(1995年)报道利用PCR-SSCP对HPA-1和HPA-3进行基因分型 。
* PCR-SEQUENCE
其他基因分型方法
* 寡核苷酸连接试验(OLA)或连接酶链式反应 。
* 同源双链优先形成试验(PHFA) 。
* 差异性解链曲线图分析 。
* 5′核酸酶分析(TaqManTM分析) 。
血小板血型的主要临床意义
* 免疫性血小板减少症
自身免疫性血小板减少症(AITP)
同种免疫性血小板减少症
药物诱导免疫性血小板减少症 (DIIT)
自身免疫性血小板减少症(AITP)
* AITP比自身免疫性溶血性贫血(AIHA)更常见。分3类：ITP，再次ITP，急性病毒感染后血小板减少症。统称ITP。
* PAIgG检测是其最有价值的试验。但是PAIgG并非特异，其阳性诊断价值仅为46%，阴性诊断价值为82%。
同种免疫性血小板减少症
* 新生儿同种免疫性血小板减少性紫癜 (NAITP )
* 输血后血小板减少性紫癜 (PTP)
* 血小板输注无效 (PTR)
新生儿同种免疫性血小板减少性紫癜 (NAITP )
* NAITP类似于红细胞血型系统的HDN
* 在白种人中，NAITP的发病率约为1/1000～1/2000，80%是由HPA1a抗体引起的。
* NAITP的死亡率约为10%，第一胎的发生率约为20%~59%。
* 产前诊断对预后非常重要。
血小板输注无效
* 约有20~50%白血病患者，80%再障患者在长期输注血小板后，发生血小板输注无效。
血小板输注 ......
血小板血型基础与临床
傅启华
主要内容
* HPA及其相关实验诊断
* 血小板血型的主要临床意义
* PTR的对策
血型
* 所有血液成分的遗传性标志。
血型的发现
* 红细胞血型：1900年，Landsteiner发现ABO血型。
* 血小板血型：1959年，Van Loghem发现Zwa血型。
* 白细胞血型：
1960年，Lalezari发现HNA
1965年，Bassuat发现HLA
血小板血型系统
* 血小板血型抗原主要有二大类
血小板相关抗原
血小板特异性抗原
血小板相关抗原
* 血小板表面存在的与其他细胞或组织共有的抗原 。又称血小板非特异性抗原或血小板共有抗原。
* 包括主要组织相容性抗原(HLA)和红细胞血型系统相关抗原 。
血小板表面的HLA抗原系统
* 血小板表面存在HLA-A、HLA-B和HLA-C位点等HLAⅠ类抗原 。
* 未发现血小板表面存在HLA-DR、HLA-DP和HLA-DQ等Ⅱ类抗原。
* 但是经过细胞因子的刺激，在血小板表面能产生HLA-DR抗原。
血小板表面的红细胞血型系统
* 血小板表面存在ABO、Lewis、I、i和P等红细胞血型系统抗原。
* 但不存在Rh、Duffy、Kell、Kidd和Lutheran等血型系统抗原。
血小板特异性抗原
* 人类血小板抗原(Human platelet antigen, HPA)
是位于血小板膜糖蛋白(glycoprotein，GP)上的抗原表位。
* 按发现时间顺序排列如下：Duzo、PlA(Zw)、PlE、Ko(Sib)、Bak(Lek)、Yuk(Pen)、Br(Hc、Zav)、PLT、Nak、Gov、Sr等等。
血小板特异性抗原系统国际命名
* 血小板特异性同种抗原系统一律命名为人类血小板抗原系统(HPA)。
* 不同的抗原系统按发现顺序用数字编号
* 对偶抗原按其在人群中频率由高到低，用字母命名，高的为a，低的为b 。
* 1990年被国际输血协会确认的血小板特异性抗原有5个系统共10种抗原，正式命名为HPA-1～HPA-5。
PNC
* 2003年国际输血协会(ISBT)和国际血栓和止血协会(ISTH)建立的血小板命名委员会(The Platelet Nomenclature Committee，PNC) 。
血小板特异性抗原的分子生物学
* 在已知其分子机理的22个血小板抗原中，其基因多态性大多是由于相应血小板膜糖蛋白结构基因中的SNP引起，而致相应位置的单个氨基酸变异所致，唯一的例外是HPA-14w。
* HPA-14w： 1909~1911delAAG
K611del
未命名的HPA
Vaa、Moua：前者被定位于GPⅡb/Ⅲa上， 后者尚未被定位。它们的等位基因结构多态性和蛋白结构多态性也也尚不了解故暂时未被归入HPA命名法。
Duzo抗原虽第一个被发现，但至今未发现第二例抗-Duzo，其所在糖蛋白、蛋白结构和基因结构多态性均未知。
血小板血型相关实验技术
* 近年来，随着分子免疫学、分子生物学的发展和各种标记技术(如流式细胞术、荧光显微镜、免疫电镜等)在医学领域的应用，血小板血清学检测方法有了很大进展，一些分子生物学技术也开始应用于血小板血型分型。
* 除血小板特异性抗原HPA外，血小板表面的HLA、ABO等抗原也具有重要临床意义。由于ABO血型可用相关红细胞方便地检测，故临床上对血小板血型的检测主要集中在HPA和HLA的检测上。
血清学试验
* 血小板免疫荧光试验(PIFT)
* 血小板固相微板技术：又称为固相红细胞粘附法(SPRCA)或混合细胞粘附试验(MRCA)
* 单克隆抗体特异的血小板抗原固定试验(MAIPA)
* 改进的抗原捕获酶联免疫吸附试验(MACE)
* 流式细胞仪检测技术(FCM)和珠子介导的血小板相关抗体检测法(LifeMatchTM Luminex100 screening assay)
* 微柱凝胶血小板定型试验
HPA基因分型
* 由于目前所知的大部分HPA等位基因多态性皆为单核苷酸多态性(SNP)，故HPA的基因分型方法与SNP检测方法类似 。
HPA基因分型方法
* PCR-RFLP ：Newman等(1989年)首先应用。 HPA-4(Yuk)和HPA-8(Sr)系统缺乏合适的酶切位点，不能直接使用此法进行分型。
* PCR-ASO ：Mcfarland等(1991年)首先将此技术用于HPA-1的分型。
* PCR-SSP ：Metcalfe和Waters等首先将此技术用于HPA-1的基因分型。
* PCR-SSCP ：Peyruchaud等(1995年)报道利用PCR-SSCP对HPA-1和HPA-3进行基因分型 。
* PCR-SEQUENCE
其他基因分型方法
* 寡核苷酸连接试验(OLA)或连接酶链式反应 。
* 同源双链优先形成试验(PHFA) 。
* 差异性解链曲线图分析 。
* 5′核酸酶分析(TaqManTM分析) 。
血小板血型的主要临床意义
* 免疫性血小板减少症
自身免疫性血小板减少症(AITP)
同种免疫性血小板减少症
药物诱导免疫性血小板减少症 (DIIT)
自身免疫性血小板减少症(AITP)
* AITP比自身免疫性溶血性贫血(AIHA)更常见。分3类：ITP，再次ITP，急性病毒感染后血小板减少症。统称ITP。
* PAIgG检测是其最有价值的试验。但是PAIgG并非特异，其阳性诊断价值仅为46%，阴性诊断价值为82%。
同种免疫性血小板减少症
* 新生儿同种免疫性血小板减少性紫癜 (NAITP )
* 输血后血小板减少性紫癜 (PTP)
* 血小板输注无效 (PTR)
新生儿同种免疫性血小板减少性紫癜 (NAITP )
* NAITP类似于红细胞血型系统的HDN
* 在白种人中，NAITP的发病率约为1/1000～1/2000，80%是由HPA1a抗体引起的。
* NAITP的死亡率约为10%，第一胎的发生率约为20%~59%。
* 产前诊断对预后非常重要。
血小板输注无效
* 约有20~50%白血病患者，80%再障患者在长期输注血小板后，发生血小板输注无效。
血小板输注 ......
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