广州中医药大学初步验证龟甲补肾健骨的机理：龟甲提取物促进骨髓间充质干细胞增殖
本报广东讯 广州中医药大学日前完成的一项国家自然科学基金研究项目表明，龟甲提取物在促进骨髓间充质干细胞(MSC)增殖过程中，可激活视黄酸受体(RARα)、维生素D受体(VDR)的表达，表明RARα、VDR是龟甲促进MSC增殖的两个药理靶点，初窖橹ち斯昙撞股鼋」堑幕怼?br> 以往的研究发现，龟甲(也称龟板)在体内、外可以促进骨髓间充质干细(MSC)的增殖并诱导MSC分化为神经元样细胞，经过较长时间诱导，MSC还可向成骨方向分化。
据研究人员介绍，继G蛋白耦联受体和离子通道之后，核受体已成为第三大类非酶性治疗靶点。RARα及VDR是核受体家族的重要成员，对人体的生长发育起着重要的作用。龟甲提取物促MSC增殖作用是否可能与核受体有关？研究按采用免疫组化法和免疫荧光细胞化学法，观察了龟甲提取物对体外培养的MSC增殖过程中核受体表达的影响，筛选促MSC增殖的药理靶点。
实验结果表明，空白对照组MSC的RARα表达为0，无阳性细胞，胞核呈红色，无阳性反应(阳性反应为绿色)；龟甲低、中、高剂量组MSC的RARα表达均明显增高，且呈浓度依赖性，胞核呈红色荧光和RARα阳性反应(绿色)，数量呈剂量依赖性增多，而高剂量组的RARα表达水平与中剂量组表达水平相当，无显著性差异，提示中剂量组(333.3微克/毫升)可能是激活细胞内信号通路或RARα受体的适宜浓度。
实验结果还显示，采用333.3微克/毫升龟甲提取物分别作用0、12、24、72、120小时；作用12小时后，MSC的RARα阳性反应细胞开始增多，随着作用时间增加，RARα表达增强；作用24小时后，MSC的RARα阳性反应达峰值；空白对照组MSC仍无阳性细胞。空白对照组MSC的VDR的表达极低，龟甲低、中、高剂量组MSC的VDR表达均明显增高，且呈浓度依赖性，胞核VDR阳性反应(绿色)明显增多，且呈剂量依赖性。采用333.3微克/毫升龟甲提取物分别作用0、12、24、72、120小时；作用24小时后，MSC的VDR阳性反应细胞开始增多，随着作用时间增加，VDR表达增强，空白对照组有少量VDR阳性反应细胞；作用72小时后，VDR表达的峰值为14.6，呈时效依赖性。
中医基础理论认为，肾主发育，肾藏“先天之精”，直接关系着机体的强弱并调控机体的生长、发育和生殖。龟甲性味咸、甘、平，入肾经，能滋阴补肾。
研究人员认为，实验采用的龟甲提取物为脂溶性成分，可直接透过细胞膜，与MSC核内的受体结合调节基因表达。龟甲对MSC增殖作用是否是通过激活核受体来实现的，为了证实这一假设，研究人员采用免疫组化和免疫荧光细胞化学方法对目前已知核受体进行龟甲提取物促MSC增殖作用的药理靶点筛选。免疫组化和免疫荧光细胞化学方法均检测不到雌激素受体(ER)、糖皮质激素受体(GR)、过氧化物酶体增殖激活受体(PPARδ)、甲状腺激素受体(TRα)阳性反应细胞。提示ER、GR、PPARδ、TRα在龟甲促MSC增殖过程中可能无作用。
据研究人员介绍，核受体是一类转录调控因子，它们的主要功能是特异性调控发育、生殖、代谢相关基因的表达。已知哺乳动物核受体分为3类，一是甾体激素受体，包括糖皮质激素、雌激素受体；二是非甾体激素受体，包括视黄酸受体、维生素D受体和甲状腺激素受体；三是具有核受体的基本特征但却未找到它们的配体，也不知道它们的靶基因和生理功能，因而将它们称为孤儿受体，例如过氧化物酶体增殖激活受体(PPARδ)。
此项研究也表明，龟甲提取物能时效和量效性促进VDR的表达。维生素D(VitD)是钙平衡和骨代谢的主要调节因子。新近研究表明VitD不仅影响钙磷代谢，而且具有广泛的重要的生理功能，有人称之为VitD内分泌系统。VDR是介导1，25二羟基维生素D3[1，25(OH)2D3]发挥生物效应的核内生物大分子，它在维持机体钙、磷代谢，调节细胞增殖与分化等方面起重要作用。通过研究敲除小鼠VDR基因后发现，VitD的大多数生物学作用是通过VDR介导的，VDR缺陷可引起多种疾病的发生。
该项研究观察了龟甲提取物对MSC的VDR表达的影响，结果显示龟甲提取物能增强MSC的VDR表达，这可能是龟甲补肾健骨的机理之一。该研究对目前已知核受体(RARα、VDR、ER、GR、PPARδ、TRα)进行龟甲提取物促MSC增殖作用的药理靶点筛选，结果证实，龟甲提取物促进MSC增殖过程中可激活RARα、VDR的表达，RARα、VDR可能是龟甲促进MSC增殖的两个药理靶点。
(宋许周)(宋许周)
据研究人员介绍，继G蛋白耦联受体和离子通道之后，核受体已成为第三大类非酶性治疗靶点。RARα及VDR是核受体家族的重要成员，对人体的生长发育起着重要的作用。龟甲提取物促MSC增殖作用是否可能与核受体有关？研究按采用免疫组化法和免疫荧光细胞化学法，观察了龟甲提取物对体外培养的MSC增殖过程中核受体表达的影响，筛选促MSC增殖的药理靶点。
实验结果表明，空白对照组MSC的RARα表达为0，无阳性细胞，胞核呈红色，无阳性反应(阳性反应为绿色)；龟甲低、中、高剂量组MSC的RARα表达均明显增高，且呈浓度依赖性，胞核呈红色荧光和RARα阳性反应(绿色)，数量呈剂量依赖性增多，而高剂量组的RARα表达水平与中剂量组表达水平相当，无显著性差异，提示中剂量组(333.3微克/毫升)可能是激活细胞内信号通路或RARα受体的适宜浓度。
实验结果还显示，采用333.3微克/毫升龟甲提取物分别作用0、12、24、72、120小时；作用12小时后，MSC的RARα阳性反应细胞开始增多，随着作用时间增加，RARα表达增强；作用24小时后，MSC的RARα阳性反应达峰值；空白对照组MSC仍无阳性细胞。空白对照组MSC的VDR的表达极低，龟甲低、中、高剂量组MSC的VDR表达均明显增高，且呈浓度依赖性，胞核VDR阳性反应(绿色)明显增多，且呈剂量依赖性。采用333.3微克/毫升龟甲提取物分别作用0、12、24、72、120小时；作用24小时后，MSC的VDR阳性反应细胞开始增多，随着作用时间增加，VDR表达增强，空白对照组有少量VDR阳性反应细胞；作用72小时后，VDR表达的峰值为14.6，呈时效依赖性。
中医基础理论认为，肾主发育，肾藏“先天之精”，直接关系着机体的强弱并调控机体的生长、发育和生殖。龟甲性味咸、甘、平，入肾经，能滋阴补肾。
研究人员认为，实验采用的龟甲提取物为脂溶性成分，可直接透过细胞膜，与MSC核内的受体结合调节基因表达。龟甲对MSC增殖作用是否是通过激活核受体来实现的，为了证实这一假设，研究人员采用免疫组化和免疫荧光细胞化学方法对目前已知核受体进行龟甲提取物促MSC增殖作用的药理靶点筛选。免疫组化和免疫荧光细胞化学方法均检测不到雌激素受体(ER)、糖皮质激素受体(GR)、过氧化物酶体增殖激活受体(PPARδ)、甲状腺激素受体(TRα)阳性反应细胞。提示ER、GR、PPARδ、TRα在龟甲促MSC增殖过程中可能无作用。
据研究人员介绍，核受体是一类转录调控因子，它们的主要功能是特异性调控发育、生殖、代谢相关基因的表达。已知哺乳动物核受体分为3类，一是甾体激素受体，包括糖皮质激素、雌激素受体；二是非甾体激素受体，包括视黄酸受体、维生素D受体和甲状腺激素受体；三是具有核受体的基本特征但却未找到它们的配体，也不知道它们的靶基因和生理功能，因而将它们称为孤儿受体，例如过氧化物酶体增殖激活受体(PPARδ)。
此项研究也表明，龟甲提取物能时效和量效性促进VDR的表达。维生素D(VitD)是钙平衡和骨代谢的主要调节因子。新近研究表明VitD不仅影响钙磷代谢，而且具有广泛的重要的生理功能，有人称之为VitD内分泌系统。VDR是介导1，25二羟基维生素D3[1，25(OH)2D3]发挥生物效应的核内生物大分子，它在维持机体钙、磷代谢，调节细胞增殖与分化等方面起重要作用。通过研究敲除小鼠VDR基因后发现，VitD的大多数生物学作用是通过VDR介导的，VDR缺陷可引起多种疾病的发生。
该项研究观察了龟甲提取物对MSC的VDR表达的影响，结果显示龟甲提取物能增强MSC的VDR表达，这可能是龟甲补肾健骨的机理之一。该研究对目前已知核受体(RARα、VDR、ER、GR、PPARδ、TRα)进行龟甲提取物促MSC增殖作用的药理靶点筛选，结果证实，龟甲提取物促进MSC增殖过程中可激活RARα、VDR的表达，RARα、VDR可能是龟甲促进MSC增殖的两个药理靶点。
(宋许周)(宋许周)