Proteomics

    Bio-Rad蛋白质组双向电泳实验操作手册

    ProteomeWorks

    TM System

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    双向电泳实验流程

    z 样品制备(Sample preparation)

    z 固相预制胶条的水化(IPG strip rehydration)

    z 第一向等电聚焦(IEF)

    z 胶条的平衡(IPG strip equilibration)

    z 第二向SDS-PAGE电泳(SDS-PAGE electrophresis)

    z 凝胶的染色及检测(Detection/Staining)

    z PDQuest软件分析(Software analysis)

    z 质谱鉴定(Protein identification)

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    目 录

    第一章 实验材料

    1.1 IPG 预制胶条及载体两性电解质

    1.2 蛋白质定量试剂盒及其试剂

    1.3 试剂盒及其试剂

    1.4 化学试剂

    1.5 蛋白质 Marker

    1.6 染色试剂

    1.7 注意事项

    第二章 SDS-PAGE聚丙烯酰胺凝胶电泳

    2. 1 溶液的配制

    2. 2 SDS-PAGE 凝胶的配制

    2. 3 操作方法

    2. 4 注意事项

    第三章 双向电泳

    3. 1 溶液配制

    3. 2 操作步骤

    3. 3 注意事项

    附录 1 双向电泳完整的操作步骤

    附录 2 聚丙烯酰胺凝胶电泳凝胶的配置

    附录 3 细胞样品的一般处理步骤

    附录 4 组织样品的一般处理步骤

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    第一章 实验材料

    1.1 IPG预制胶条及载体两性电解质

    (一)IPG预制胶条(美国 Bio-Rad公司)，-20℃冰箱保存

    IPG预制胶条 pH 3-10， 7 cm 163-2000

    IPG预制胶条 pH 3-10， 7 cm ，nonlinear(NL) 163-2002

    IPG预制胶条 pH 4-7， 7 cm 163-2001

    IPG预制胶条 pH 3-6， 7 cm 163-2003

    IPG预制胶条 pH 5-8， 7 cm 163-2004

    IPG预制胶条 pH 7-10， 7 cm 163-2005

    IPG预制胶条 pH 3-10， 17cm 163-2007

    IPG预制胶条 pH 3-10， 17 cm，nonlinear(NL) 163-2009

    IPG预制胶条 pH 4-7， 17cm 163-2008

    IPG预制胶条 pH 3-6， 17cm 163-2010

    IPG预制胶条 pH 5-8， 17cm 163-2011

    IPG预制胶条 pH 7-10， 17cm 163-2012

    IPG预制胶条 pH 3-10， 18cm 163-2032

    IPG预制胶条 pH 3-10， 18cm，nonlinear(NL) 163-2033

    IPG预制胶条 pH 4-7， 18cm 163-2034

    IPG预制胶条 pH 3-6， 18cm 163-2035

    IPG预制胶条 pH 5-8， 18cm 163-2036

    IPG预制胶条 pH 7-10， 18cm 163-2037

    IPG预制胶条 pH 3-10， 11cm 163-2014

    IPG预制胶条 pH 3-10， 11cm，nonlinear(NL) 163-2016

    IPG预制胶条 pH 4-7， 11cm 163-2015

    IPG预制胶条 pH 3-6， 11cm 163-2017

    IPG预制胶条 pH 5-8， 11cm 163-2018

    IPG预制胶条 pH 7-10， 11cm 163-2019

    IPG预制胶条 pH 3.9-5.1，17cm 163-2020

    IPG预制胶条 pH 4.7-5.9，17cm 163-2021

    IPG预制胶条 pH 5.5-6.7，17cm 163-2022

    IPG预制胶条 pH 6.3-8.3，17cm 163-2023

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    IPG预制胶条 pH 3.9-5.1，18cm 163-2038

    IPG预制胶条 pH 4.7-5.9，18cm 163-2039

    IPG预制胶条 pH 5.5-6.7，18cm 163-2040

    IPG预制胶条 pH 6.3-8.3，18cm 163-2041

    IPG预制胶条 pH 3.9-5.1，11cm 163-2024

    IPG预制胶条 pH 4.7-5.9，11cm 163-2025

    IPG预制胶条 pH 5.5-6.7，11cm 163-2026

    IPG预制胶条 pH 6.3-8.3，11cm 163-2027

    IPG预制胶条 pH 3.9-5.1，7cm 163-2028

    IPG预制胶条 pH 4.7-5.9，7cm 163-2029

    IPG预制胶条 pH 5.5-6.7，7cm 163-2030

    IPG预制胶条 pH 6.3-8.3，7cm 163-2031

    (二)载体两性电解质(美国 Bio-Rad公司)，4℃冰箱保存

    Bio-Lyte 3/10 Ampholyte，40%，10ml 163-1112

    Bio-Lyte 3/10 Ampholyte，40%，25ml 163-1113

    Bio-Lyte 3/5 Ampholyte，20%，10ml 163-1132

    Bio-Lyte 4/6 Ampholyte，40%，10ml 163-1142

    Bio-Lyte 4/6 Ampholyte，40%，25ml 163-1143

    Bio-Lyte 5/7 Ampholyte，40%，10ml 163-1152

    Bio-Lyte 5/7 Ampholyte，40%，25ml 163-1153

    Bio-Lyte 6/8 Ampholyte，40%，10ml 163-1162

    Bio-Lyte 6/8 Ampholyte，40%，25ml 163-1163

    Bio-Lyte 7/9 Ampholyte，40%，10ml 163-1172

    Bio-Lyte 8/10 Ampholyte，20%，10ml 163-1182

    Bio-Lyte 5/8 Ampholyte，40%，10ml 163-1192

    Bio-Lyte 5/8 Ampholyte，40%，25ml 163-1193

    (三)等电聚焦上样缓冲液(美国 Bio-Rad公司)，4℃冰箱保存

    100×ReadyStrip Buffer，for pH 7-10 IPG Strips ......