重视病理医生在免疫组织化学应用中的主导作用.ppt
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重视病理医生在免疫组织化学应用中的主导作用
北京友谊医院病理科
周小鸽
2002年德国的一次
免疫组化质量评估测试
6所大学，172位病理医生
组委会选了21个病例作成30个点位的多组织芯片
1张HE切片和5张白片
要求:初步诊断，选择抗体做免疫组化，评估染色的质量，解读染色的结果，得出结论，并做出最终诊断。
然后交组委会进行评估，最后评估的结论，让人大吃一惊：
主要问题：
不是染色质量(技术员)问题而是医生的问题，即病理诊断中如何应用免疫组化的问题，其中对染色结果的解读又是突出的问题。
最后，组委会建议：
(1)、加强质控，(2)、对病理医生加强训练。
前言
免疫组织化学技术是一场革命
纯形态形态 + 免疫信号 = 现代病理学
不可缺少的、最重要的辅助手段，"常规"。
问题不少：多步骤、多因素、复杂性
影响了最终的病理诊断
误区：免疫组化的问题 = 技术员的问题
从全过程看，病理医生起着主导作用。
病理医生发挥作用的方面
1、决定抗体的配备
2、正确选择抗体
3、决定抗体联合配套使用
4、正确选择测试片
5、确定阳性对照
6、监控染色结果、分析染色问题、指导改善染色技术
7、判断和解读染色结果
8、在病理报告中正确描述免疫组化结果
1、决定抗体的配备
战略问题。医生或科主任决定。
抗体种类、数量
抗体与诊断水平的相关性
10种与100抗体的差异
科室应因实际而定
吸收新抗体
P504s与前列腺癌和正常前列腺组织
CD117的单克隆与多克隆
2、正确选择抗体
如何正确选择抗体？
1、形态学是前提、基本功
2、掌握抗体：性能、适应范围、交叉反应
比如，NK/T细胞淋巴瘤表达胞浆型的CD3ε，而不表达
胞膜型的CD3
选择不当就会得出错误结论
3、决定抗体联合配套使用
为了以尽量避免得到片面的结果，而造成错误的解释，得出错误诊断，做免疫组化时常常需要选择抗体配套，很少仅用单一抗体。
区别T细胞和B细胞淋巴瘤
2种T细胞抗体：CD3，CD43(CD45RO)
2种B细胞抗体：CD20，CD79a
这种配套是出于抗体的特异性和敏感性的考虑
4、正确选择测试片
病理医生不仅决定着选用什么抗体，同时还决定着测试哪一张切片。很多病例的组织切片不止一张，不同的切片中，组织成分常常并不完全一样，有的切片中包含病变成分，有的没有。因此，不能任意选择一张去做免疫组化。在实际工作中我们偶尔也遇上免疫组化染色片上不存在所期望检查的组织，除去技术员选错了蜡块或病变没切到外，确有病理医生在选择测试片时出错的情况存在。正确选择测试片是获得正确免疫组化结果的前提，因此，病理医生不应忽视这一简单而重要的一步。
5、确定阳性对照
阴性对照--技术员
阳性对照--医生
1、内部对照(自身对照)
理想的对照，测试条件相同，结果更可靠更具有可比性
2、外部对照
(1)、多组织切片
(2)、"腊肠" "春卷"切片
(3)、组织芯片
(4)、阑尾
6、监控染色结果、分析染色问题、指导改善染色技术
* 质控的关键环节、拦截技术问题要塞
* 把握守住这个要塞就能及时发现问题，及时解决问题，避免造成不良后果。在此环节把关的人应该是接受过免疫组化良好训练的技术员或病理医生，他们即要懂得免疫组化的理论，也要精通免疫组化的技术，这样才有能力发现问题，知道原因、提出改进的办法。
* "准入制度" ，合格制：4级：优、良、中、差
7、判断和解读染色结果
* 重要环节
信号 结果(阳性或阴性)结论
1、信号定位、强弱、广泛度
2、抗体知识
如果只懂得CD20阳性代表B细胞、CD45RO阳性代表T细胞，就会将浆细胞瘤诊断为T细胞淋巴瘤；
如果不知道CD45RO是T细胞相关抗原，而把它视为特异抗原，就会对少数表达CD45RO的B细胞瘤感到迷惑，不知道为什么T、B标记都阳性了。
3、病理学知识
如果根据哪种信号多就判断为阳性，就会将T细胞丰富的B细胞淋巴瘤或霍奇金淋巴瘤诊断为T细胞淋巴瘤；如果只根据大细胞就考虑为肿瘤细胞，就会将免疫母细胞较多的反应性增生诊断为霍奇金淋巴瘤或B细胞淋巴瘤
8、在病理报告中
正确描述免疫组化结果
* 报告中的描述和诊断是整个免疫组化的最终体现，是病理医生之间、病理医生与临床医生之间进行交流的媒介，是法律性的资料。
例1：病理诊断：胃低分化腺癌。
免疫组化结果：AE1/AE3阳性，LCA阴性，支持以上诊断。
例2：病理诊断：淋巴结内淋巴滤泡增多、变大，滤泡间区增宽，滤泡间区见散在的免疫母细胞样大细胞，该细胞呈 CD20阳性、CD30阳性、CD15阴性，提示为活化的B淋巴细胞，病变为淋巴组织反应性增生。
为了临床的治疗和预后判断的需要，有时只写阴性或阳性是不够的，要求进行半定量的表示如+、++、+++分别表示不同的阳性程度，或用百分比表示，如20%细胞阳性。采用哪一种表示方式要根据不同情况来确定，对有统一规定的抗体，如CerbB-2，应用"+"表示，"+++"的病例可采用Herceptin治疗，"+"的病例则不能使用，"++"的病例应重做免疫组化或做FISH检查；对目前尚无统一规定的抗体，如CD20，最好用"%"表示，这样便于采用美罗华治疗后进行比较。此外，Ki-67阳性细胞数也用"%"表示。
小结
纵观免疫组化应用的全过程，病理医生在多个环节起着至关重要的作用，主导着免疫组化的最终结果。要使免疫组化能真正地、有效地为病理诊断服务，病理医生必须与技术员密切配合，共同努力争取获得合格的、准确的免疫组化结果。
重视病理医生在免疫组织化学应用中的主导作用
北京友谊医院病理科
周小鸽
2002年德国的一次
免疫组化质量评估测试
6所大学，172位病理医生
组委会选了21个病例作成30个点位的多组织芯片
1张HE切片和5张白片
要求:初步诊断，选择抗体做免疫组化，评估染色的质量，解读染色的结果，得出结论，并做出最终诊断。
然后交组委会进行评估，最后评估的结论，让人大吃一惊：
主要问题：
不是染色质量(技术员)问题而是医生的问题，即病理诊断中如何应用免疫组化的问题，其中对染色结果的解读又是突出的问题。
最后，组委会建议：
(1)、加强质控，(2)、对病理医生加强训练。
前言
免疫组织化学技术是一场革命
纯形态形态 + 免疫信号 = 现代病理学
不可缺少的、最重要的辅助手段，"常规"。
问题不少：多步骤、多因素、复杂性
影响了最终的病理诊断
误区：免疫组化的问题 = 技术员的问题
从全过程看，病理医生起着主导作用。
病理医生发挥作用的方面
1、决定抗体的配备
2、正确选择抗体
3、决定抗体联合配套使用
4、正确选择测试片
5、确定阳性对照
6、监控染色结果、分析染色问题、指导改善染色技术
7、判断和解读染色结果
8、在病理报告中正确描述免疫组化结果
1、决定抗体的配备
战略问题。医生或科主任决定。
抗体种类、数量
抗体与诊断水平的相关性
10种与100抗体的差异
科室应因实际而定
吸收新抗体
P504s与前列腺癌和正常前列腺组织
CD117的单克隆与多克隆
2、正确选择抗体
如何正确选择抗体？
1、形态学是前提、基本功
2、掌握抗体：性能、适应范围、交叉反应
比如，NK/T细胞淋巴瘤表达胞浆型的CD3ε，而不表达
胞膜型的CD3
选择不当就会得出错误结论
3、决定抗体联合配套使用
为了以尽量避免得到片面的结果，而造成错误的解释，得出错误诊断，做免疫组化时常常需要选择抗体配套，很少仅用单一抗体。
区别T细胞和B细胞淋巴瘤
2种T细胞抗体：CD3，CD43(CD45RO)
2种B细胞抗体：CD20，CD79a
这种配套是出于抗体的特异性和敏感性的考虑
4、正确选择测试片
病理医生不仅决定着选用什么抗体，同时还决定着测试哪一张切片。很多病例的组织切片不止一张，不同的切片中，组织成分常常并不完全一样，有的切片中包含病变成分，有的没有。因此，不能任意选择一张去做免疫组化。在实际工作中我们偶尔也遇上免疫组化染色片上不存在所期望检查的组织，除去技术员选错了蜡块或病变没切到外，确有病理医生在选择测试片时出错的情况存在。正确选择测试片是获得正确免疫组化结果的前提，因此，病理医生不应忽视这一简单而重要的一步。
5、确定阳性对照
阴性对照--技术员
阳性对照--医生
1、内部对照(自身对照)
理想的对照，测试条件相同，结果更可靠更具有可比性
2、外部对照
(1)、多组织切片
(2)、"腊肠" "春卷"切片
(3)、组织芯片
(4)、阑尾
6、监控染色结果、分析染色问题、指导改善染色技术
* 质控的关键环节、拦截技术问题要塞
* 把握守住这个要塞就能及时发现问题，及时解决问题，避免造成不良后果。在此环节把关的人应该是接受过免疫组化良好训练的技术员或病理医生，他们即要懂得免疫组化的理论，也要精通免疫组化的技术，这样才有能力发现问题，知道原因、提出改进的办法。
* "准入制度" ，合格制：4级：优、良、中、差
7、判断和解读染色结果
* 重要环节
信号 结果(阳性或阴性)结论
1、信号定位、强弱、广泛度
2、抗体知识
如果只懂得CD20阳性代表B细胞、CD45RO阳性代表T细胞，就会将浆细胞瘤诊断为T细胞淋巴瘤；
如果不知道CD45RO是T细胞相关抗原，而把它视为特异抗原，就会对少数表达CD45RO的B细胞瘤感到迷惑，不知道为什么T、B标记都阳性了。
3、病理学知识
如果根据哪种信号多就判断为阳性，就会将T细胞丰富的B细胞淋巴瘤或霍奇金淋巴瘤诊断为T细胞淋巴瘤；如果只根据大细胞就考虑为肿瘤细胞，就会将免疫母细胞较多的反应性增生诊断为霍奇金淋巴瘤或B细胞淋巴瘤
8、在病理报告中
正确描述免疫组化结果
* 报告中的描述和诊断是整个免疫组化的最终体现，是病理医生之间、病理医生与临床医生之间进行交流的媒介，是法律性的资料。
例1：病理诊断：胃低分化腺癌。
免疫组化结果：AE1/AE3阳性，LCA阴性，支持以上诊断。
例2：病理诊断：淋巴结内淋巴滤泡增多、变大，滤泡间区增宽，滤泡间区见散在的免疫母细胞样大细胞，该细胞呈 CD20阳性、CD30阳性、CD15阴性，提示为活化的B淋巴细胞，病变为淋巴组织反应性增生。
为了临床的治疗和预后判断的需要，有时只写阴性或阳性是不够的，要求进行半定量的表示如+、++、+++分别表示不同的阳性程度，或用百分比表示，如20%细胞阳性。采用哪一种表示方式要根据不同情况来确定，对有统一规定的抗体，如CerbB-2，应用"+"表示，"+++"的病例可采用Herceptin治疗，"+"的病例则不能使用，"++"的病例应重做免疫组化或做FISH检查；对目前尚无统一规定的抗体，如CD20，最好用"%"表示，这样便于采用美罗华治疗后进行比较。此外，Ki-67阳性细胞数也用"%"表示。
小结
纵观免疫组化应用的全过程，病理医生在多个环节起着至关重要的作用，主导着免疫组化的最终结果。要使免疫组化能真正地、有效地为病理诊断服务，病理医生必须与技术员密切配合，共同努力争取获得合格的、准确的免疫组化结果。
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