作者单位:日本神户市西区高琢台 日本 SYSMEX株式会社学

    术部

    · 国际学术交流·

    血细胞分析仪的溯源及国际参考方法

    藤本 敬二

    为加强对血细胞分析仪的溯源及国际参考方法了解 ,作者主要对血细胞计数分析(红细胞计数、白细胞计数、血小

    板计数、血红蛋白以及红细胞压积)的国际参考方法建立的

    过程和及其概要进行了阐述 ,并对国际参考方法与各实验室

    目前方法学的溯源性进行了论述。在具体工作流程上 ,对使

    用人新鲜血或经过了稳定固化加工的血细胞确立检验结果

    溯源性方法及其注意事项进行了介绍 ,同时论述了室间质控

    和室内质控的重要性。

    1.血细胞分析和国际血液学标准化委员会的历史: 血

    细胞计数是临床检查中最基本最重要的项目 ,检测内容包括

    红细胞 ,白细胞和血小板等血细胞计数项目以及血红蛋白浓

    度的测定。血细胞计数最初是使用显微镜对显微镜视野内

    的各种细胞以人工目视的方法进行计数 ,但是 , 1953 年

    Coulter公司的创始人 ,W1H1Cloulter 成功的研制出世界第

    一台自动“流体中悬浮颗粒分析仪”之后[ 1 ,2 ]

    ,经过不断的技

    术革新 ,其自动化技术逐步应用于血细胞分析仪中。另外 ,作为一种简便的检测血液中红细胞浓度的方法 ,可将全血放

    入试管中 ,经过离心分离后测量沉淀的红细胞体积与样品体

    积的比例 ,即所谓的红细胞压积(Packed Cell Volume ,PVC) 。

    现在 ,红细胞压积的检测也已经成为自动血细胞分析仪的检

    测指标之一。

    红细胞中的血红蛋白具有输送氧气功能 ,其定量检测最

    初使用试管进行检测的 ,现在该方法也已经实现自动化 ,已

    成为自动血细胞分析的指标之一。这类可实现血细胞分析

    自动化的装置通常被称之为血细胞分析仪或 Hematology

    Analyzer ,最初在欧洲和北美被迅速普及。1963 年 ,在欧洲

    血液学会里斯本会议(葡萄牙)上 ,召开了题为“血细胞分析

    技术及其标准化”的研讨会 ,大家发现 ,被认为是比显微镜检

    查准确度高的各种自动血细胞分析仪的检测结果大相径庭

    (室间差异) ,为了解决这个问题 ,大会设立了国际血液学标

    准化 委 员 会 ( International Council for Standardization in

    Haematology) 。其中的血红蛋白检测专家组和血液细胞分

    析专家组一直在展开各种活动 ,致力于确立血红蛋白检测的

    国际参考方法和血液细胞分析的国际参考方法。

    2002 年末 ,血细胞分析的基本指标红细胞、白细胞、血

    小板分析及血红蛋白浓度以及 PCV检测的国际参考方法都

    已确立。

    2.血细胞分析(红细胞、白细胞、血小板)国际参考方法

    概略:红细胞和白细胞的国际参考方法制定于 1994 年[ 3 ]。

    检测系统中的所有血液流路部分都采用加工后多年不会变

    形的石英玻璃部件 ,定量部使用水银压力计。为了最大程度

    减少流体检测中的误差 ,设计尽可能简单 ,检测原理为电阻

    法。根据检验原理 ,需要对全血样品进行数万倍的稀释 ,为

    了最大程度减少稀释过程中的误差 ,要使用 A 级的精密烧

    瓶和精密吸管。仪器对同时通过检测部位的细胞不具有修

    正功能 ,但可对一系列不同稀释比例的标本进行校准。利用

    不同浓度的标本同时通过检测部位的细胞数的比例不同的

    原理 ,以连续稀释的检测结果计算出无限稀释倍率浓度时的

    检测结果(在该浓度下 ,可认为没有细胞同时通过检测部) ,并将该结果确定为所测标本的“真值”。

    血小板的国际参考方法于 2001年[ 4 ]

    确定。在此之前曾

    对各种方法经过长期的讨论 ,由于各种方法各有优劣都没有

    得到通过 ,新的参考方法是采用流式细胞术以单克隆抗体

    (CD41和 CD61)对全血进行识别 ,得到红细胞总数和血小板

    总数的比率。再根据血小板和红细胞的比率 ,乘以红细胞参

    考方法所检测得到的红细胞真值来间接计算出血小板的真

    值。

    3.血红蛋白的定量和 PCV 国际参考方法简介:血红蛋

    白的定量是血细胞分析项目之中最早确立国际参考方法的

    指标 ,随后又进行过多次改定[ 5 ] ......