收稿日期:2000202212

    四逆汤中附子甘草配伍规律研究

    陈建萍 , 谭炳炎 , 吴伟康 , 张敏生 , 李礼娟3

    , 韩超3

    (广州中山医科大学 ,广州 510089)

    摘要:目的:观察四逆汤中药附子、甘草配伍前后主要成分的含量变化。方法:采用串联质谱 ESI 2MSP MS及 HPLC测定附子

    中的主要成分在配伍前后含量变化 ,采用薄层扫描测定甘草中的主要成分甘草酸在配伍前后的含量变化。结果:附子与甘草

    配伍后乌头类生物碱和甘草酸的含量均明显降低。

    关键词:附子;甘草;ESI 2MSP MS ,HPLC ,TLC

    中图分类号:R28411 文献标识码:B 文章编号:100529903 (2001) 0320016202

    四逆汤(SD)源于张仲景的《伤寒论》 ,是治疗少

    阴虚寒证的代表方剂 ,临床主要用于少阴病 ,四肢逆

    冷 ,下利清谷 ,脉微细无力等症。在既往的研究发

    现 ,SD对冠心病心肌缺血具有良好的保护作用 ,本

    研究在此基础上 ,以 SD 方药为研究对象 ,从方药配

    伍的君、臣、佐、使关系出发 ,以君药附子为核心 ,对

    其中药味附子、甘草组成的方药进行药物成分定性

    定量相关性分析 ,对 SD方药中主要药味配伍进行规

    律性的研究。

    1 仪器和试剂

    API 2 365 电喷雾离子化2质谱质谱( ESI 2MSP MS)

    联用仪( Perkin elmer2SCIEX 公司) ;Waters 公司高效

    液相色谱仪 ,486检测器 ,510 泵 ,810 色谱工作站;日

    本岛津 CS 2930型双波长薄层扫描仪。

    中药来源:附子(黑顺片) ( Aconitium carmichaeli

    Debx. ) 、甘草( Glycyrrhizae uralensis Fisch) 、干姜( Zin2

    giber off icinale Rosc. ) (均购于广州药材公司 ,经广州

    中药大学药鉴教研室鉴定) ;甘草浸膏用上述甘草原

    药材自制;甘草酸单铵盐对照品(中国药品生物检定

    所) ;硅胶 GF254 (青岛海洋化工厂) ;其他化学试剂均

    为分析纯。

    2 方法与结果

    211 样品溶液的制备 分别称取附子(50g) ,附子

    (50g) +甘草(20g) ,附子(50g) ,甘草(20g) ,于 4 个烧

    杯中 ,加入 8 倍量的水 ,水浴煮沸 2h ,过滤 ,滤液浓

    缩 ,醇沉 ,取醇层 ,回收乙醇将附子及甘草煎剂混合 ,上述方法形成附子单煎剂 ,附子与甘草的合煎剂以

    及附子甘草单煎后再混合 ,此三种溶液均以附子量

    定容至1 :1 ,得供试液 ,备用。各取供试液 5ml ,用氨

    水调pH值等于 9 ,溶液用乙醚提取 2 次 ,每次 10ml ,挥干 ,渣用少量二氯甲烷溶解 ,移入 1ml 容量瓶中 ,加二氯甲烷至刻度 ,摇匀 ,备用。

    212 对照品溶液的制备 精密称取乌头碱 210mg ,次乌头碱213mg ,新乌头碱 115mg ,置小烧杯中 ,加入

    二氯甲烷溶解后 ,移入 10ml 容量瓶中 ,加入二氯甲

    烷至刻度摇匀 ,即得。

    213 定性分析

    21311 乌头类生物碱的薄层分析 将上述点样液

    各取10 μl ,点于同一块硅胶 G薄层板上。用氯仿:甲

    醇(9 :1)为展开系统 ,加适量的氨水饱和展开缸 ,上

    行展开 ,展距13～15cm ,碘蒸气为显色剂进行显色。

    21312 甘草的薄层层析 各取供试液各10 μl ,点于

    同一块硅胶 GF254薄层板上 ,用正丁醇:冰醋酸:水

    (6 :1 :3)为展开系统。紫外灯下显色。

    214 定量分析

    21411 附子配伍前后乌头类生物碱的含量变化

    扫描方式:Q1 扫描( ESIP MS)正离子;Q3 扫描分

    解 CID谱。

    样品处理:取 Tab1中的方药2ml ,用等量的甲醇

    稀释 ,过滤后 ,用水稀释10倍 ,直接用spring泵进样 ,30 μlP min ,计算机数据处理。用对照品扫描确定所测

    化学成分的离子峰 ,得到分子量值及顺序信息。

    MSP MS分析:用串联质谱 ESI 2MSP MS 将对照品

    及各样品溶液进行测定 ,结果见表1。

    · 61 ·

    第7卷第3期

    2001年6月

    中国实验方剂学杂志

    Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae

    Vol . 7 ,No. 3

    Jun. ,2001

    · 1995-2005 Tsinghua Tongfang Optical Disc Co., Ltd. All rights reserved.表1 SD方药不同配伍中乌头类生物碱的MRM分析结果

    样品 结果 乌头碱 次乌头碱

    均值 438133 3530

    附子 RSD 16135 % 21215 %

    浓度(μgP ml) 317 1619

    均值 55127 131133

    附+甘 RSD 26107 % 71815 %

    浓度(μgP ml) 015 016

    均值 7912 1536

    混合物 RSD 16135 % 21215 %

    浓度(μgP ml) 016 715

    21412 甘草配伍前后甘草酸的含量变化 测试样

    品的制备:4002g(相当于甘草原生药量 215g)用 50 %

    乙醇适量充分溶解 ,滤过 ,弃去沉淀 ,用 50 %乙醇定

    容50ml ,得甘草酸样品液。

    取上述批号甘草浸膏等量 ,按比例(附子:甘草

    = 5 :2)与附子醇沉液合并 ,回收乙醇后 ,用50 %乙醇

    定容50ml 得配伍样品液 Ⅰ和 Ⅱ。

    样品测定:分别准确吸取各样品液 4 μl 和甘草

    酸标准液 8 μl ,分别点于同一硅胶 GF254薄层板上按

    213法展开 ,定位扫描测定 ,记录吸收度积分值。外

    标一点法定量 ,测得各样品液甘草酸含量 ,并将此成

    分与附子醇溶液合并后定容 ,与单纯的甘草的体积

    相同。结果见表2。

    表2 甘草酸样品液及配伍样品液Ⅰ和Ⅱ测定结果(mg , n = 3)

    项 目 平均值( ? x ±s) CV ( %)

    甘草酸样品液 90138± 5169 6129

    配伍样品液Ⅰ 74113± 2141 3125

    配伍样品液Ⅱ 76158± 1175 2129

    3 讨论

    311 从薄层色谱图1可以看出 ,附子 ,附子 +甘草 ,附子、甘草混合提取不同的配伍后附子的主要成分

    乌头碱、次乌头碱均存在 ,但可能含量上有所变化。

    从薄层色谱图2可以看出 ,甘草、附子 +甘草以及单

    独提取后再混合 ,其甘草的主要成分甘草酸及次甘

    划酸的成份均存在。

    312 从表1可知,附子甘草合煎剂、附子、甘草单独

    提取后再混合 ,其中乌头类生物碱的含量显著降低。

    且附子中乌头碱的稳定性相对差些 ,说明两味药物

    相互作用可能产生不溶性的物质(因为乌头碱与甘

    草中的甘草酸可能形成络合物)从而减少乌头碱、次

    乌头碱的含量。从表 2 可知 ,附子与甘草配伍后甘

    草酸的含量也有所降低。其原因与上述原因相同 ,是附子与甘草的有关成分在一起形成不溶性的沉淀

    形成络合物 ,从而降低其含量 ,用薄层色谱对两药配

    伍以后甘草酸的含量也发生变化 ,其减少的剂量与

    乌头碱类生物碱一致。

    通过比较研究我们可以发现 ,附子与甘草两药

    在配伍使用时较佳的方法为先单煎然后再混合为

    佳。从附子、甘草所含成分在同煎可能会发生络合

    作用 ,生成络合物 ,形成沉淀 ,而被滤出。但其络合

    物在进入消化道以后可以在胃酸中或酶的作用下络

    合物可以发挥生理作用效应。还可能增加疗效[1 ]

    ,同时降低附子中乌头碱的毒副作用。笔者曾做过相

    关的药理实验 ,结果表明 ,单味药物的作用远不及药

    味之间的配伍运用。分析其机制可能是由于生物碱

    与甘草酸所产生的沉淀在体内的环境中会缓慢地释

    放 ,从而维持其血药浓度。难怪在中药经典复方中

    沉淀将两味药同时使用 ,充分体现了中药复方配伍

    存在着的内在规律。

    中药复方配伍规律是十分复杂的过程 ,其药味

    之间作用与其成分相的关系不一定是正比例 ,而在

    体外不起作用的成分进入机体以后可能转化成具有

    生物学活性的物质 ,而发挥药理效应[2 ,3 ]。

    参考文献:

    [1 ] 陈建萍 ,吴伟康 ,谭红梅. 四逆汤方药对缺血心肌冠脉

    流量的影响[J ] .第一军医大学学报 ,1999 ,19(2) :121.

    [2 ] 陈建萍 ,吴伟康 ,张敏生 ,等.中药复方配伍规律研究的

    思路与方法[J ] .中国实验方剂杂志 ,2000 , (1) :1.

    [3 ] 梁国刚.中药复方化学研究方法的探讨[J ] . 中国中药

    杂志 ,1999 ,24(1) :36.

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    第7卷第3期

    2001年6月

    中国实验方剂学杂志

    Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae

    Vol . 7 ,No. 3

    Jun. ,2001

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